简介：目的：克隆培养SD大鼠皮肤真皮多能干细胞,并对其生物学特性进行检测,以期为组织工程再生牙齿探寻一种可靠的成体干细胞.方法：采用贴壁细胞培养法和有限稀释法培养出生1d的SD仔鼠掌趾部皮肤真皮成纤维细胞,分别检测其克隆形成能力、增殖能力和多向分化能力,并对其进行分子标志分析.结果：培养获得的SD大鼠皮肤真皮成纤维细胞,其中7株单克隆来源的细胞具有较强的克隆形成能力、较高的细胞群体倍增能力;同时,这部分细胞高表达细胞表面分子标志物CD44和CD90;成骨诱导后可形成矿化结节,成脂诱导后可见细胞内出现脂滴.结论：利用贴壁细胞培养法和有限稀释法培养皮肤真皮成纤维细胞,可获得具有类似间充质干细胞的生物学特性的真皮多能干细胞.本实验成功培养并获得了单克隆来源的真皮多能干细胞,为后续实验奠定了基础.

简介：桩核烤瓷冠是前牙牙体缺损常见的修复方法.在以往制作修复体过程中,患者有5-7天等待铸桩核加工过程的时间,此期间患者因暴露残根、残冠影响美观.我们在临床上探索出直接快速制作临时冠的简便方法,解决了这一问题,取得了满意疗效.

简介：目的探讨变形链球菌（S．mutans）荧光素酶（luc）基因报告株构建方法，拟为探讨抗菌剂对多菌种生物膜中S．mutans的作用提供研究基础。方法将S．mutansUA159乳酸脱氢酶（ldh）基因及其上游部分约1100000片段克隆至自杀质粒pFW5-luc的多克隆位点，构建重组质粒．并经酶切和测序证实。采用自然转化的方法，实现重组自杀质粒和S．mutansUA159同源序列的单次交换。结果经过聚合酶链反应（PCR）和测序分析，筛选出具有报告活性的S．mutansldh-luc基因荧光报告株。结论成功构建了S．mutansldh-luc基因荧光报告株。

简介：目的：探讨高效的原代成年大鼠下颌骨成骨细胞培养方法，为进一步的实验研究奠定基础。方法：将4-6周SD成年大鼠处死并取出下颌骨，剪碎，用改良的酶消组织块培养法培养细胞，通过相差显微镜观察，用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫荧光染色和钙结节染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果：所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征，碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论：改良的酶消组织块培养法，可获得大量高纯度的下颌骨成骨细胞，所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。

简介：目的：探讨应用GM—CSF、IL-4、TNF—α及肿瘤细胞裂解液体外诱导舌鳞状细胞癌患者外周血来源树突状细胞（DC）的方法。方法：选取10例舌鳞状细胞癌患者和6例健康人，抽取外周血，分离单核细胞，经贴壁获得树突状细胞前体细胞，在体外先后加入GM—CSF、IL-4和肿瘤细胞裂解液、TNF—α诱导培养，获得成熟DC，进行形态学观察，以流式细胞术检测DC标志物表达率。实验中设置舌癌组和健康对照组，肿瘤裂解液诱导组和空白对照组，采用t检验进行统计学分析。结果：经9d诱导培养，细胞数量增加，体积增大，相差显微镜、HE染色和扫描显微镜下均见细胞表面树突状突起，呈典型DC形态。舌癌组DC平均获得率9．9％，与健康组无显著差异（P=0．1287）。舌癌组成熟DC标志物CD83表达率为37．19％，共刺激因子CD40、CD80和MHC分子HLA—DR的表达率分别为51．79％、48．43％和65．82％。与健康组无显著差异（P〉0．05）。肿瘤细胞裂解液诱导组较对照组可获得更高的DC获得率和成熟率，分别为P=0．0186和P=0．0473。结论：舌癌患者外周血来源DC前体细胞经体外诱导培养，可以转变为形态和功能成熟的DC；肿瘤细胞裂解液刺激，有助于提高DC获得率和成熟率。

简介：日趋成熟的成体干细胞体外分离、培养、定向诱导分化和鉴定技术,使牙再生研究取得了显著进展.继牙髓干细胞成功分离培养并用于牙再生研究之后,相继利用牙周膜干细胞、牙囊干细胞、牙乳头干细胞和骨髓间充质干细胞作为牙再生的种子细胞,取得了令人瞩目的成果.本综述从上述种子细胞的分离、培养、鉴定等方面阐述牙再生研究中的干细胞技术.

简介：目的:制备针对人釉原蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法:用原核表达系统表达纯化的重组人全长釉原蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠体内诱导制备腹水,通过饱和硫酸铵沉淀法和蛋白G亲和层析柱纯化抗体。结果:筛选到3株能稳定分泌抗人釉原蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为H10G1、H3G1、G5H3。腹水单克隆抗体效价分别为1∶243000、1∶729000、1∶729000,纯化后单克隆抗体效价为1∶81000、1∶243000、1∶729000。3株单克隆抗体抗原表位分析显示均识别人釉原蛋白45~149位的氨基酸序列。结论:成功制备出针对人釉原蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究探讨釉原蛋白在牙根发育及牙周再生中的功能奠定了基础。

简介：目的：构建和鉴定靶向E2F-1基因的RNA干扰慢病毒载体。方法：体外合成两对互补并编码靶向E2F-1基因的特异性短发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）序列和一个阴性对照组的寡核苷酸,克隆到pLKO.1-PURO-U6（AgeI/EcoRI）质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Tca8113细胞后,运用Real-TimePCR和Western检测三组E2F-1mRNA和蛋白的表达水平。结果：经酶切和测序证明,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA序列正确;转染后,各组慢病毒载体中,第一组质粒感染后的Tca8113细胞中E2F-1基因的核酸电泳条带明显减弱,Western检测出E2F-1蛋白的表达降低。结论：靶向E2F-1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,并可特异性沉默E2F-1基因的表达,为研究E2F-1在口腔鳞癌的发生发展中的作用提供了初步的实验基础。

简介：目的：计算机辅助软件进行颞下颌关节手术前设计，经快速原型技术制作模型，探讨该技术在下颌骨及颞下颌关节重建中的应用价值。方法：选取11例（13侧）需要进行髁突-下颌支-下颌体重建手术的患者为快速原型组，术前均进行头颅三维CT扫描（层厚0．625mm）：将DICOM格式的CT数据输入电脑软件SimplantCMF，通过软件对头颅模型进行下颌骨分离、截骨线设计、截骨及骨块移动；利用镜面反射原理，以健侧下颌骨为标准，重建患侧下颌骨；然后以重建的头颅模型为标准．对钛板进行塑形；术中根据已经塑形好的钛板，对移植骨块进行塑形，重建颞下颌关节。另选24例用传统方法进行髁突-下颌支-下颌体重建的患者作为对照组。采用SPSS13．0软件包分析2组患者手术用时，并采用两独立样本t检验：对Simplant测量出的CT扫描数据，采用配对t检验分析快速原型组内手术前、后面部对称性的差异。结果：所有患者伤口均一期愈合，无感染、出血、面神经损伤等并发症发生；术后临床及影像学检查显示，患者面形基本对称，对手术效果满意，咬合关系良好：MRI显示移植的肋骨肋软骨头均在关节窝内。手术用时传统方法平均为7．09h，快速原型组平均为5．67h．两组之间有显著性差异（P〈0．05）；应用Simplant对下颌骨CT扫描的数据进行处理，测量每个患者术后的CI（condyle—incisor）、CM（condyle—mentalforamen）、CA（condyle—angle）3组变量，对健、患侧的测量数据进行配对t检验，3个指标的健、患侧均无显著差异（P〉0．05）。结论：利用快速原型技术，可以达到准确重建颞下颌关节、保持下颌骨双侧对称的目的，有利于改善术后颞下颌关节功能，提高颞下颌关节及下颌骨重建的效果。

简介：目的：研究携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞的分离、鉴定及意义。方法：收集颅骨锁骨发育不良（cleidocranialdysplasia,CCD）患者,鉴定其致病基因RUNX2的突变位点,通过离体培养CCD患者的未萌牙牙囊细胞,检测其携带的基因突变位点,鉴定RUNX2＋/m牙囊细胞。结果：全血基因组测序结果发现,患者RUNX2基因第2外显子插入TG突变,该突变型为c.309_310insTG,成功分离培养及鉴定RUNX2＋/m牙囊细胞,并发现RUNX2基因突变减少了牙囊细胞中此蛋白的表达水平。结论：成功分离培养携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞,为进一步研究RUNX2基因在牙囊及牙齿萌出中的作用提供实验模型。

简介：目的：探寻小鼠牙乳头来源MDPC-23细胞自发形成的体外破牙细胞的培养方法。方法MDPC-23细胞常规培养6d，利用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法与RANKL诱导RAW264.7细胞形成的破骨细胞相比较；金相显微镜及扫描电镜（SEM）观察牙本质片上细胞形态及吸收陷窝形成情况；免疫荧光染色观察丝状肌动蛋白（F-actin）细胞骨架结构；免疫印迹、免疫荧光和（或）ELISA法检测破牙细胞形成相关蛋白RANKL、RANK、TRAF6以及破牙细胞标志蛋白TRAP、组织蛋白酶K（CathepsinK）的表达情况。CathepsinK和TRAP蛋白表达的灰度值比较采用两独立样本的t检验进行统计；0、2、4、6d四个时间点RANKL分泌水平的比较采用方差分析进行统计分析。结果MDPC-23细胞常规培养6d可自发形成少量TRAP染色阳性的多核巨细胞，其形态有别于RAW264.7细胞形成的破骨细胞；自发形成的多核巨细胞仅能在牙本质片上形成少量较浅的吸收陷窝；免疫荧光结果显示，自发形成的类破牙细胞具有破牙细胞特征性丝状肌动蛋白环结构；免疫印迹、免疫荧光和（或）ELISA结果表明，MDPC-23细胞体外常规培养下表达RANK、TRAF6蛋白并自分泌RANKL，第0、2、4、6天RANKL分泌水平总体差异有统计学意义（F=5.373，P=0.026），第2天RANKL分泌水平较第0天增加（P=0.007）；第6天TRAP及CathepsinK蛋白表达上调（tTRAP=5.033，PTRAP=0.0024；tCathepsinK=12.95，PCathepsinK=0.0002）。结论MDPC-23细胞体外常规培养下可自发形成少量吸收能力较弱的TRAP染色阳性的多核巨细胞，具有特征性肌动蛋白环结构，同时能上调破牙细胞特征性蛋白TRAP和CathepsinK表达，自分泌RANKL并表达RANK、TRAF6蛋白，是与成熟破牙细胞形态、结构及蛋白表达相似的类破牙细胞。

简介：上颌快速腭扩展可有效地扩大上颌牙弓，其不仅适用于儿童及青少年，也可成功地用于成人上颌牙弓狭窄的矫治。本文介绍了年轻成人与儿童各自应用上颌快速腭扩展术的生物学基础、存在的各种分歧、扩弓过程中磨牙及腭弓形态变化的差异、难易程度及其长期的效果与稳定性的差异、各自优势及所需要注意的问题。

简介：上颌快速扩大（rapidmaxillaryexpansion，RME）是一种矫治上颌横向宽度不调的常用方法，随着对该研究的日益加深．这种方法不仅被用于矫治上颌狭窄，后牙反雅，轻中度牙弓拥挤．而且也有国外文献报道用于治疗鼻腔、上呼吸道阻塞及传导性听力下降。笔者在临床中治疗1例上颌狭窄合并传导性听力下降病例，上颌狭窄改善后听力恢复，国内尚未见同类报道．现总结如下：

简介：本刊对重大研究成果，将使用“快速通道”，在最快时间内发表。稿件要求：（1）凡内容涉及重大创新和国内首创，达到或超过国内或国际先进水平的基础和临床研究的论文，均可申请进入“快速通道”；（2）作者本人提出进入“快速通道”申请；（3）提供国内外数据库的查新报告；（4）提供申请快速发表论文的作者署名无争议、发明权（即首创权）无争议的证明；

简介：目的：使用计算机辅助的方法来评价外科辅助上颌快速腭开展（SARME）术后的各种变化．如骨块位置变化、切开骨缝处新骨沉积、骨密度方面的区别。材料和方法：研究包括29位患者（18位男性，11位女性）．平均年龄29岁（16～44岁）．每位患者都施行包含LeFortⅠ型截骨的外科辅助上颌快速腭开展，在术前和术后6～8周都拍摄高分辨率CT。在术前术后CT数据配准后．我们构建了三维模型并进行重合。切开骨缝中的新骨沉积能通过专为该研究设计的可视化程序观察。骨密度的分析则是先将模型分为不同的勰剖区域，定性比较是通过一种特殊转换功能——直接体绘制程序完成．定量比较是通过各区域术前术后绘制的条形图完成。结果：通过计算机辅助分析证实．所有患者都实现了上颌骨的扩宽。4位患者显示术后发生了明显的上颌不对称。在切开骨缝中新骨沿着骨缝不规则沉积．但通常左右是对称的。切开的骨缝越对称．新骨生成也越对称。除2个病例外，其余病例的术后定性定量分析均显示Hounsfield值明显下降．前庭骨尤甚。结论：切开骨缝中新骨生成上的区别表明了不同的手术方法和扩弓器的种类对结果有影响。我们的结果显示SARME会导致骨密度下降．以前庭骨尤甚。计算机辅助分析是一种获取信息的方法。

简介：目的探讨牙龈卟啉单胞菌W83PG0352基因突变株的构建和鉴定。方法本实验于2011年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。建立PG0352突变质粒，在T载体上插入PG0352上游基因、红霉素抗性基因和PG0352下游基因，用电转化的方法将质粒转入牙龈卟啉单胞菌菌细胞中，用含有红霉素的TSB培养基筛选PG0352突变株，并通过PCR、RT—PCR和酶活性检测方法对突变株进行鉴定。结果在含有红霉素的TSB培养基中可见牙龈卟啉单胞菌的菌落，用PCR方法证实在这些菌落中PG0352基因被红霉素抗性基因所替代，且唾液酸酶活性丧失。结论通过电转化的方法可成功获得PG0352基因突变株，为研究PG0352基因的功能奠定基础。

简介：目的：探讨应用快速成型制造（rapidprototypingandmanufacturing,RPM）技术制作个体化桩核的可行性,以期为临床应用奠定基础。方法：以CT影像为数据源,通过Mimics10.0软件处理,建立残冠/残根数字模型;通过Geomagic9.0软件构建桩核体三维数字模型（库）;应用反求软件得到残冠/残根点云数据,对桩核体及根部进行曲面设计,借助CAD软件对曲面模型进行实体化操作及工艺结构设计,将其轮廓数据转换为快速成型系统中的轮廓数据,快速成型制造出个体化桩核,通过测量桩核的边缘浮出量和适合性检测其可行性。结果：RPM制作的所有桩核均可精密就位,效果满意。制作桩核边缘浮出量（45.95±8.09）μm;适合性：在根管口处分别为（79.33±9.69）μm,在根管中部分别为（80.68±10.74）μm,在根管底部分别为（82.05±11.46）μm。结论：RPM技术可用于制作个体化桩核的设计和制造,为个体化修复开辟了新的途径,具有良好的应用前景。

简介：目的比较Hyrax快速与慢速扩弓矫治替牙晚期上颌狭窄的疗效。方法选取2011年1月至2012年12月来大连市口腔医院正畸科就诊的替牙晚期上颌基骨狭窄患者60例,随机分成2组,分别采用Hyrax快速扩弓与Hyrax慢速扩弓进行矫治,扩弓前后拍摄锥形束CT（conebeamcomputerizedtomography,CBCT）,通过Invivo5牙科软件三维重建,分别测量扩弓前后上颌第一磨牙、第一前磨牙冠状位硬腭水平基骨宽度、颊侧牙弓宽度、双侧牙槽骨倾斜角度的交角、双侧牙齿倾斜角度的交角,轴位颊、舌侧骨质厚度。扩弓前后数据采用SPSS17.0统计软件进行分析。结果冠状位：Hyrax快速扩弓与Hyrax慢速扩弓在骨性开展和牙弓总宽度变化上无差别,扩弓后牙弓总宽度增加,第一前磨牙平面的骨开展量大于第一磨牙平面,牙齿和牙槽嵴颊向倾斜,牙槽嵴倾斜的角度慢速扩弓组大于快速扩弓组,牙齿倾斜的角度快速扩弓组大于慢速扩弓组;轴位：颊侧骨质厚度减少,舌侧骨质厚度增加,但Hyrax慢速扩弓组颊侧的减少量小于Hyrax快速扩弓组,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对于替牙晚期患者,与Hyrax快速扩弓相比,Hyrax慢速扩弓慢速轻力的特点更符合生理特性,并且对颊侧的骨质厚度影响小,是一种有效的扩弓方式。

简介：目的研究牙周模牵张成骨速移动牙齿时牙髓组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量变化情况。方法2009年12月至2010年2月选用山东大学实验动物中心提供健康杂种犬18只,随机分为9组,每组2只。以单根的第一前磨牙作为移动牙,通过牙周膜牵张成骨快速移动牙齿,分别在加力2（A1组）、4（A2组）周及各自加力后保持1（B1、B2组）、2（C1、C2组）、4（D1、D2、E组,其中E组为对照组,不加力）周时,取出牙髓组织标本,利用酶联免疫吸附试验检测牙髓组织中TNF-α含量。结果TNF-α含量在牵张加力2、4周后明显升高,停止牵张加力后第1、2周TNF-α含量明显降低,第3、4周TNF-α含量稳定在一定水平上,其含量低于对照组。结论牙槽骨牵张2周及4周快速移动牙齿时,牙髓内TNF-α含量均可在牵张后2周内基本恢复正常,而牵张后7～14d则为其转变的关键时期。

简介：目的研究上颌前方牵引联合快速扩缩弓治疗恒牙早期安氏Ⅲ类错黯的骨性及牙性疗效。方法选取10例恒牙早期安氏Ⅲ类错殆患者，观察6个月作为观察对照期，随后应用前方牵引联合快速扩缩弓矫治6个月为治疗期．应用Pitchfork分析法比较对照期和治疗期在平均功能性殆平面上骨骼及牙齿的位置变化。结果磨牙关系改变了7．2mm（t=6．85．P〈0．05），包括骨性改变4．4mm、牙性改变2．8mm；骨性改变中上下颌骨贡献率约为1：3，牙性改变中上下磨牙贡献率约为2：3。结论前方牵引联合快速扩缩弓可有效治疗恒牙早期安氏Ⅲ类错胎，可取得较大的牙殆关系改善。