简介：目的探讨血小板裂解物体外培养、扩增人骨髓基质干细胞的可行性。方法将富含血小板血浆以冻融裂解法处理,培养人骨髓基质干细胞;体系中加入不同浓度的裂解物,MTT法检测细胞体外增殖情况;流式细胞仪分析细胞表型特征,并应用细胞化学染色法观察细胞体外成骨和成脂肪能力。结果血小板裂解物培养的骨髓基质干细胞呈典型的成纤维细胞形态,均一呈现CD14、CD31、CD34、CD45及HLA-DR阴性和CD73、CD90、CD105、CD166阳性,具备体外成骨、成脂分化能力。此外,与经筛选的胎牛血清比较,低浓度血小板裂解物即具有支持骨髓基质干细胞扩增的能力。结论血小板裂解物可替代胎牛血清,用于骨髓基质干细胞的体外扩增。

简介：目的建立裂解液加热煮沸法抽提血液HBVDNA的方法。方法选取浓度分别为10^6、10^5、10^4、10^3copies/ml的HBVDNA阳性血清,采用5种方法抽提HBVDNA,并用SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测抽提产物。结果在HBVDNA浓度为10^6、10^5、10^4copies/ml时5种抽提法（异硫氰酸胍加热煮沸/盐酸胍加热煮沸/kit/SDS加热煮沸/chelex-100加热煮沸）均能得到阳性结果,而在HBVDNA为低浓度10^3copies/ml时,只有异硫氰酸胍加热煮沸/盐酸胍加热煮沸/chelex-100加热煮沸能得到阳性结果。结论chelex-100裂解液加热煮沸抽提HBVDNA操作简便、省时、经济,为血液标本HBV基因检测在临床上的大规模应用奠定基础。

简介：[摘要] 目的:探讨整骨接骨药丸联合自体血小板裂解液治疗四肢骨折的临床疗效。方法: 2019年1月至2019年6月本院四肢创伤科收治的92例四肢骨折患者，所有患者均为伤后3小时就诊的新鲜闭合骨折。其中男63例，女29例；年龄20～56岁，中位数42.5岁；摔伤56例，车祸伤36例；胫腓骨骨折42例，股骨骨折27例，尺桡骨骨折15例、肱骨骨折8例。所有患者均采用切开复位内固定手术治疗骨折，术后一周行X线观察骨折复位情况。所有患者采用口服整骨接骨药丸联合自体血小板裂解液治疗。X线观察患者骨折解剖复位，骨性愈合时间，无血管、神经损伤等并发症的情况。提前制备患者自体血小板裂解液，并检测裂解液中的成分及含量；在手术后第十天开始行自体血小板裂解液治疗。治疗时在C形臂X线机透视下定位骨折端，分多点少量的方法注入自体血小板裂解液，每隔3 d治疗1次，共治疗3次。所有患者的治疗均由同一组高年资医师完成。分别于注射自体血小板裂解液后2个月、3个月、4个月和6个月在X线片上评价骨折愈合情况，观察并发症发生情况。结果:①自体血小板裂解液成分及含量。制备的患者自体血小板裂解液中，主要成分为VEGF和TGF-β，其含量分别为（565.34±22.14）pg·mL-1和（198.57±25.43）pg·mL-1。②疗效和安全性评价结果。所有患者骨折均解剖复位，无血管、神经损伤等并发症。所有患者均获随访，随访时间2～6个月，中位数4个月。92例患者中有88例达到骨性愈合标准，愈合率为95.65%，骨折愈合时间3～6个月，中位数4.5个月。结论:采用整骨接骨药丸联合自体血小板裂解液治疗骨折可有效促进骨折愈合，疗效确切，具有较好的应用前景。

简介：

简介：目的:构建并鉴定血管血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体,并研究其生物学功能。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截断型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠,经标准单克隆抗体技术制备单克隆抗体。用ELISA方法鉴定单克隆抗体的特异性;应用免疫印迹技术确定单克隆抗体与全长ADAMTS13的识别能力;观察单克隆抗体对ADAMTS13水解vWF的影响。结果:最终获得6株抗ADAMTS13的单克隆抗体,克隆号分别为1G11、2F11、6G3、9E1、10A8、10B4。经ELISA鉴定,纯化后的单克隆抗体1G11和2F11的效价最高,与截断型ADAMTS13-T7蛋白结合能力比较,明显高于全长ADAMTS13蛋白。Westernblotting结果显示,6个单克隆抗体都能与全长ADAMTS13结合,其中1G11和2F11条带最亮。功能实验表明,在变性条件下1G11和2F11能够明显抑制ADAMTS13水解vWF,并随着单克隆抗体浓度的增加而抑制作用增强。结论:成功获得针对ADAMTS13的单克隆抗体,其中两株为抑制性功能抗体。

简介：背景：课题组前期研究发现国产多孔钽有利于MG63细胞的早期黏附、增殖,可用作骨组织工程支架材料。血小板裂解液是富血小板血浆进一步优化后的产物,更适合用于诱导修复骨缺损。目的：在前期研究基础上,深入探索血小板裂解液联合国产多孔钽支架材料对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响。方法：培养MG63细胞并接种在国产多孔钽支架上,加入3%、5%、7%、10%血小板裂解液,应用CCK-8法筛选出最佳的体积分数7%进行以下实验。实验分组：空白对照组MG63细胞培养;血小板裂解液组：7%血小板裂解液与MG63细胞共同培养;多孔钽组：多孔钽支架材料与MG63细胞共同培养;血小板裂解液-多孔钽组：7%血小板裂解液、多孔钽与MG63细胞共同培养。扫描电镜观察国产多孔钽及血小板裂解液-多孔钽-MG63细胞复合物的表面形态;CCK-8法检测MG63细胞的增殖状态;qPCR、免疫细胞化学染色、Western-blot检测MG63细胞ITGβ1、Vinculin、F-actin的mRNA和蛋白表达。结果与结论：①扫描电镜显示,MG63细胞均良好地黏附在多孔钽支架表面;②与空白对照组比较,血小板裂解液组与多孔钽组均可促进MG63细胞的增殖（P〈0.05）;4组中,血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的增殖最显著（P〈0.05）;③qPCR、免疫细胞化学染色、Western-blot结果显示,4组中血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的ITGβ1、Vinculin、F-actin的mRNA及蛋白表达最多（P〈0.05）。说明血小板裂解液和国产多孔钽支架材料能协同促进MG63细胞的增殖,并能上调ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路mRNA及蛋白的表达,该信号通路的激活可能有助于MG63细胞的增殖、黏附及分化。