简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

简介：目的：探讨联合检测人附睾蛋白4（HE4）、血清糖类抗原125（CA125）和199（CA199）在绝经后卵巢可及综合征（PMPOS）中的应用价值。方法：采用化学发光法（CLIA）检测125例PMPOS患者及60例健康志愿者（对照组）血清HE4、CA125和CA199的水平,其中PMPOS患者分为良性肿瘤组（良性组,n=50）和恶性肿瘤组（恶性组,n=75）。结果：PMPOS恶性组患者血清HE4、CA125和CA199水平均显著高于良性组,有统计学差异（P〈0.05）;也显著高于对照组,有统计学差异（P〈0.05）。良性组的CA125水平略高于对照组,有统计学差异（P〈0.05）;但CA199和HE4水平与对照组比较无明显差异,无统计学差异（P〉0.05）。三者联合检测用于诊断PMPOS恶性肿瘤的敏感度达到81.2%,而特异度也保持在90.0%。结论：联合检测HE4、CA199和CA125可有效提高对PMPOS恶性卵巢肿瘤的诊断效率,具有较大的临床意义。

简介：Threetypesofroughsurfacewereprocessedbylaserirradiationonthe3Cr2W8Vmaterialhot-workdiesteelsurface.Thewearexperimentswithsmoothsurfaceandroughsurfacesampleswererepeatedonthepin-traywearmachine.Accordingtothewearresults,westudiedtheregularityofwearresistanceofdifferentroughsurfacesamples.Theresultsindicatedthatbionicroughsurfacecanimprovethewearresistanceofthematerialandthewearresistancecanbeincreased1-2times,comparedwiththesmoothsurface.Also,thewearresistanceoftheroughsurfacewasaffectedbylasercurrentanddurationofimpulse.Thebiggerthelasercurrentortheimpulseduration,thebetteristhewearresistance.Whenthedistancebetweenthesamekindofunitswhicharedistributedonthesurfacesischanged,thewearresistancechanges.Thewearresistanceofabionicroughsurfaceonwhichthegridunitsweredistributedatspacingof1mmwasthebest.Andwedesignedthewearmodels.

简介：以ＣＺＢ为基础培养液，培养小鼠２、４、８－细胞胚胎的卵裂球，研究葡萄糖、牛磺酸和胰岛素对１／２卵裂球体外发育的影响及１／４、１／８和２／８卵裂球的体外发育规律。２－细胞胚胎卵裂球在ＣＺＢ中和在添加牛磺酸的ＣＺＢ中培养，其囊胚发育率（分别为９２％、８９％）无显著差异（Ｐ＞０．０５）。胰岛素在少量葡萄糖存在的情况下，不影响卵裂球的囊胚发育率；在无葡萄糖时，卵裂球的囊胚发育率（３８％）显著降低。牛磺酸在

简介：目的：研究SARS冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法：应用免疫共沉淀、GST—pulldown、BIACORE实验验证SARS—CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用，BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS—CoVN蛋白的亲和常数为Ko=4．3×10^-11。结论：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物，这为进一步探讨SARS—CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。

简介：利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72～96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48～96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达.

简介：利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4的相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体的同源和异源相互作用的双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递的功能区在中间连接区,SMAD3的功能区在C末端。

简介：生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是上世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,FancL(也叫Pog)的缺失是产生gcd突变小鼠的原因.FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物中的组分之一.在生殖细胞中,FANCL与GGN1和GGN3相互作用,而GGN1和GGN3蛋白的功能还不清楚.为了研究GGN3的功能,揭示更多的参与该过程的蛋白质,运用Clontech公司新开发的第三套酵母双杂交系统以GGN3为诱饵从成年小鼠睾丸cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白分子.发现了一个精子生成期间在睾丸中特异性高表达的基因Ggnbp2,免疫共沉淀分析表明,Ggnbp2编码的蛋白质产物GGNBP2在哺乳动物细胞中与GGN3特异相互作用.通过构建突变体,确定了GGNBP2蛋白与GGN3相互作用的区域.以上结果为揭示GGN3和GGNBP2在生殖发育中的功能、丰富生殖细胞发育的蛋白调控网络及其调控规律奠定了一定的基础.

简介：本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞.这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同.本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构域编码序列,进一步探讨CRD结构域的生物学功能.由于该突变体序列GC含量较高,因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达.通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在.利用亲和层析纯化CRD结构域完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构域在hSCGF分子中的生物学功能.研究结果表明,去掉完整CRD结构域的突变分子仍然具有造血刺激活性.据此推断CRD结构域在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用.

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简介：目的：构建4E—BPl及其T37A、T46A、$65A、T70A突变体4E—BPl-4A基因表达的重组慢病毒载体，研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法：PCR扩增4E—BPl基因及其突变体aE—BPl-4A基因并克隆到pCDH载体，构建成pCDH-4E—BPl、pCDit一4E—BPl—4A，将其-9包装载体共转染293T细胞，包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞，Western印迹鉴定病毒载体介导的4E—BPl、4E～BPl—4A蛋白的表达，MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E—BPl、4E—BPl—4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果：包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞；MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E—BP!可抑制胃癌HGC27细胞的生长，过量表达4E—BP!一4A时抑制效果更明显。结论：构建了4E—BPl、4E—BPI-4A的重组慢病毒表达载体，在胃癌HGC27细胞中过量表达4E—BPl可抑制细胞生长，过量表达4E—BPl-4A的抑制效果更明显。

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简介：白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检测IL-4水平,但价格昂贵。本实验制备rhIL-4抗血清以应用于IL-4的生物学活性研究及临床检测IL-4水平等方面。

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白，可以与B7结合，通过阻断B7与CD28的结合，从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号，可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr，并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中，用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。

简介：Bcl-2基因属于Bcl-2基因家族，其表达的Bcl-2蛋白在细胞凋亡过程中通过抑制线粒体中细胞色素C的释放，可明显地抑制细胞凋亡。由于在大规模的细胞培养过程中，细胞的死亡以凋亡为主，所以可通过建立稳定过表达Bcl-2蛋白的重组细胞株，以抑制细胞的凋亡。同时，Bcl-2蛋白的变化不但可预见肿瘤的发生，而且通过药物降低Bcl-2的含量对于肿瘤的治疗也具有积极的意义。本文综述了Bcl-2蛋白的结构、功能、抗凋亡作用的机理，以及目前在生物制药和临床方面的应用和前景。

简介：C3d是补体C3不可再被酶解的最小片段,在抗原特异性免疫建立之前,C3d可识别非己抗原并与之共价结合,增强了抗原递呈细胞的递呈能力、降低了B细胞的活化阈、提高特异性抗体的滴度、促进抗体亲和力成熟等.近年来研究显示,C3d还可以促进抗原特异性细胞免疫应答水平并改变机体免疫应答模式.所以,C3d是连接固有性免疫和获得性免疫的桥梁.本文对C3d的分子生物学特征、生物学功能以及作为分子佐剂可能的分子机制进行了简要总结.

简介：细胞毒T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）是激活的T细胞表达的一种膜蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，它通过与B7分子的结合来阻止共刺激信号的传递，抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖活化，起到抑制免疫反应及诱导免疫耐受的作用。CTLA-4在自身免疫病、过敏性疾病、感染、肿瘤及抗移植排斥等领域具有广阔的应用前景。简要综述了CTLA-4的基因、分子结构，及其与T细胞应答的关系。

简介：P16ink4是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`（ink4）基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16ink4cDNA。扩增得到556bp片段（包括引物两端酶切位点的16bp）克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16ink4cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16ink4cDNA已成功地得到克隆。