简介：摘要目的观察microRNA-21（miR-21）敲除对耐伊马替尼的人慢性髓性白血病细胞株K562/G01细胞在增殖、药物敏感性等方面的影响，初步探讨miR-21影响K562/G01细胞伊马替尼敏感性的可能机制。方法运用CRISPR/Cas9技术敲除K562/G01细胞的miR-21，经PCR筛选、Sanger测序鉴定和实时定量PCR检测获得miR-21敲除的单细胞克隆。扩增培养后，采用MTT法、细胞克隆形成实验检测miR-21敲除对K562/G01细胞增殖的影响。使用伊马替尼处理细胞后，用MTT法和Annexin Ⅴ-APC/7-AAD双染流式细胞检测法观察敲除miR-21后K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性的变化。Western blot法检测miR-21敲除前后K562/G01细胞PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达量的变化。结果成功构建了3个miR-21敲除的K562/G01单细胞克隆，CRISPR/Cas9介导的突变效率为7.12%~8.11%。miR-21敲除使K562/G01细胞的增殖受抑，野生型和1#、2#、6#单细胞克隆的克隆形成率依次为（57.67±8.25）%、（26.94±5.36）%、（7.17±2.11）%、（31.50±3.65）%，差异有统计学意义（P<0.05）。miR-21敲除使K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性增加，野生型和1#、2#、6#单细胞克隆对伊马替尼的IC50值分别为（21.92±1.36）µmol/ml、（3.98±0.39）µmol/ml、（5.38±1.01）µmol/ml、（9.24±1.36）µmol/ml，差异有统计学意义（P<0.05）。miR-21敲除后，其靶基因PTEN的蛋白表达水平未见明显变化，但PI3K、AKT信号分子的活化受到抑制，并且P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达也下调。结论miR-21敲除抑制K562/G01细胞增殖，提高其对伊马替尼的敏感性，这可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路和BCR-ABL表达实现的。

简介：摘要目的观察microRNA-21（miR-21）敲除对耐伊马替尼的人慢性髓性白血病细胞株K562/G01细胞在增殖、药物敏感性等方面的影响，初步探讨miR-21影响K562/G01细胞伊马替尼敏感性的可能机制。方法运用CRISPR/Cas9技术敲除K562/G01细胞的miR-21，经PCR筛选、Sanger测序鉴定和实时定量PCR检测获得miR-21敲除的单细胞克隆。扩增培养后，采用MTT法、细胞克隆形成实验检测miR-21敲除对K562/G01细胞增殖的影响。使用伊马替尼处理细胞后，用MTT法和Annexin Ⅴ-APC/7-AAD双染流式细胞检测法观察敲除miR-21后K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性的变化。Western blot法检测miR-21敲除前后K562/G01细胞PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达量的变化。结果成功构建了3个miR-21敲除的K562/G01单细胞克隆，CRISPR/Cas9介导的突变效率为7.12%~8.11%。miR-21敲除使K562/G01细胞的增殖受抑，野生型和1#、2#、6#单细胞克隆的克隆形成率依次为（57.67±8.25）%、（26.94±5.36）%、（7.17±2.11）%、（31.50±3.65）%，差异有统计学意义（P<0.05）。miR-21敲除使K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性增加，野生型和1#、2#、6#单细胞克隆对伊马替尼的IC50值分别为（21.92±1.36）µmol/ml、（3.98±0.39）µmol/ml、（5.38±1.01）µmol/ml、（9.24±1.36）µmol/ml，差异有统计学意义（P<0.05）。miR-21敲除后，其靶基因PTEN的蛋白表达水平未见明显变化，但PI3K、AKT信号分子的活化受到抑制，并且P210BCR-ABL、p-P210BCR-ABL蛋白表达也下调。结论miR-21敲除抑制K562/G01细胞增殖，提高其对伊马替尼的敏感性，这可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路和BCR-ABL表达实现的。