简介：摘要目的探讨氢吗啡酮对脓毒症性脑病的影响，以及氢吗啡酮对脓毒症性脑病的神经保护与雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导的自噬的关系。方法无特定病原体(SPF)级健康雄性C57BL/6小鼠160只，8~10周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为4组(n＝40)：假手术组(Sham)、脓毒症性脑病组(SAE)、脓毒症性脑病+氢吗啡酮组(SAE+HP)、脓毒症性脑病+氢吗啡酮+mTOR激动剂MHY1485组(SAE+HP+MHY)。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型，SAE+HP组于模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg，SAE+HP+MHY组于模型建立前1 d腹腔注射MHY1485 10 mg/kg，持续2 d，模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg。记录术后8 d生存情况。术后24 h处死小鼠，采用苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织病理学结果，采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测海马组织自噬相关蛋白p-mTOR、mTOR、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、与B淋巴细胞瘤-基因2相互作用的肌球蛋白样螺旋蛋白(Beclin-1)的表达，免疫荧光染色观察海马组织LC3阳性细胞。CLP术后4~8 d行Morris水迷宫实验，记录逃避潜伏期和目标象限停留时间。组间比较采用单因素方差分析。结果SAE组海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于Sham组[(231±20) ng/L比(111±15) ng/L、(191±20) ng/L比(55±3) ng/L、(351±20) ng/L比(80±6) ng/L，F＝139.942、274.485、1 055.362，P<0.05]；SAE组p-mTOR/mTOR比值高于Sham组(1.412±0.057比0.313±0.046，F＝1 341.453，P<0.05)，SAE组Beclin-1蛋白表达水平低于Sham组(0.332±0.021比0.976±0.053，F＝755.084，P<0.05)，SAE组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达高于Sham组(0.942±0.03比0.344±0.022，F＝226.552，P<0.05)，差异均有统计学意义；SAE组海马神经元退行性改变，细胞核固缩、深染，免疫荧光染色SAE组海马CA1区神经元LC3荧光强度低于Sham组(6.15±2.12比17.5±3.07，F＝56.020，P<0.05)；SAE组小鼠逃避潜伏期延长，目标平台停留时间缩短[逃逸潜伏期：5 d(F＝32.947)，6 d(F＝33.322)，7 d(F＝41.888)，8 d(F＝44.685)；目标平台停留时间(F＝16.210，P<0.05)]，差异有统计学意义。SAE+HP组IL-1β、IL-6、TNF-α水平低于SAE组[(161±15) ng/L比(231±20) ng/L、(95±12) ng/L比(191±20) ng/L、(200±12) ng/L比(351±20) ng/L，F＝48.244、104.252、257.444，P<0.05]；SAE+HP组p-mTOR/mTOR比值低于SAE组(0.869±0.064比1.412±0.057，F＝238.676，P<0.05)，SAE+HP组Beclin-1表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值高于SAE组(0.788±0.039比0.332±0.021、1.513±0.055比0.942±0.039，F＝625.670、163.195，P<0.05)；SAE+HP组海马神经元退行性病变改善；SAE+HP组LC3荧光强度高于SAE组(22.5±4.5比6.2±2.1，F＝66.306，P<0.05)，差异均有统计学意义，SAE+HP组小鼠认知功能改善。MHY1485逆转了SAE+HP组氢吗啡酮的神经保护作用。结论氢吗啡酮通过抑制mTOR信号通路，促进自噬，从而减轻脓毒症性脑病。

简介：摘要目的评价大鼠肺缺血再灌注时核因子E2相关因子2(Nrf2)与铁死亡的关系。方法健康雄性SD大鼠54只，体重220~250 g，采用随机数字表法分为3组(n＝18)：假手术组(Sham组)、肺缺血再灌注组(IR组)和肺缺血再灌注+Nrf2激动剂萝卜硫素组(IR+SFP组)。采用夹闭左肺门60 min再灌注120 min的方法建立肺缺血再灌注损伤模型。IR+SFP组于肺缺血前3 d腹腔注射萝卜硫素500 μg/kg，1次/d，给药结束后2 h制备模型。再灌注结束时处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，BCA法检测蛋白浓度，酶联免疫吸附法测定IL-6、TNF-α浓度；处死后，取肺组织，透射电镜下观察肺组织超微结构，计算肺组织湿重/干重(W/D)比值，比色法检测Fe2+、MDA、谷胱甘肽(GSH)含量，Western blot法检测核蛋白Nrf2、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)表达。结果与Sham组比较，IR组BALF蛋白、IL-6和TNF-α浓度、肺组织W/D比值、Fe2+和MDA含量升高，GSH含量降低，GPX4表达下调，核蛋白Nrf2、ACSL4表达上调(P<0.05)，Ⅱ型肺泡上皮细胞表现出铁死亡特征性改变包括线粒体皱缩，线粒体嵴减少；与IR组比较，IR+SFP组BALF蛋白、IL-6和TNF-α浓度、肺组织W/D比值、Fe2+和MDA含量降低，GSH含量升高，核蛋白Nrf2和GPX4表达上调，ACSL4表达下调(P<0.05)，肺组织病理改变明显减轻。结论大鼠肺缺血再灌注时Nrf2可抑制铁死亡，参与其内源性保护机制。

简介：摘要目的评价丙泊酚对睡眠剥夺大鼠社交行为中内侧前额叶皮层(mPFC)神经元活动的影响。方法SPF级健康雄性SD大鼠60只，8周龄，体重200~250 g，采用随机数字表法分为3组(n＝20)：对照组(Con组)、慢性睡眠剥夺+自然睡眠组(CSD+NS组)和慢性睡眠剥夺+丙泊酚组(CSD+Pro组)。采用改良水平台法建立大鼠睡眠剥夺模型，每天睡眠剥夺20 h，自然睡眠4 h，连续28 d。CSD+Pro组于睡眠剥夺后腹腔注射丙泊酚40 mg/kg，连续28 d。C组和CSD+NS组腹腔注射等容量10%脂肪乳剂。睡眠剥夺第1、14和28天进行大脑皮质区域的脑电图记录。睡眠剥夺结束后，采用TUNEL法检测mPFC凋亡神经元，计算凋亡指数。采用三箱社交实验检测大鼠社交行为，采集mPFC局部场电位信号。结果与Con组比较，CSD+NS组快速动眼睡眠百分比增加，2个阶段嗅探时间偏好系数降低，社交探嗅过程中mPFC局部场电位信号β波和θ波频段功率百分比减少，mPFC神经元凋亡指数增加(P<0.05)；与CSD+NS组比较，CSD+Pro组快动眼睡眠百分比增加，2个阶段嗅探时间偏好系数增加，社交过程中mPFC局部场电位信号β波和θ波频段功率百分比增加，神经元凋亡指数降低(P<0.05)。结论丙泊酚抑制睡眠剥夺大鼠mPFC神经元凋亡，增加睡眠剥夺后社交行为mPFC局部场电位信号β波和θ波，有助于改善睡眠剥夺诱导的社交障碍。

简介：摘要目的评价Yes相关蛋白1(YAP1)在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用及其与铁死亡的关系。方法雄性野生型小鼠和肺泡上皮细胞YAP1基因条件性敲除小鼠各24只，9~10周龄，体重22~25 g。采用随机数字表法分别将两种小鼠分为2组(n＝12)：野生型假手术组(WT＋Sham组)和野生型脓毒症急性肺损伤组(WT＋ALI组)、基因敲除型假手术组(CKO＋Sham组)和基因敲除型脓毒症急性肺损伤组(CKO＋ALI组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症急性肺损伤模型。于CLP后24 h时收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，BCA法测定蛋白浓度，酶联免疫吸附法测定IL-1β、TNF-α浓度。随后处死小鼠，取肺组织，计算肺组织湿重/干重(W/D)比值，观察肺组织超微结构，比色法检测Fe2＋、MDA和GSH的含量，Western blot法检测YAP1、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和重组溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达。结果与WT＋Sham组比较，WT＋CLP组BALF蛋白、IL-1β和TNF-α浓度升高，肺组织W/D比值、Fe2＋和MDA含量升高，GSH含量降低，GPX4和SLC7A11表达下调，ACSL4表达上调(P<0.05)，肺泡上皮细胞出现线粒体皱缩，线粒体嵴减少的铁死亡特征性改变。与WT＋CLP组和CKO＋Sham组比较，CKO＋CLP组BALF蛋白、IL-1β和TNF-α浓度升高，肺组织W/D比值、Fe2＋和MDA含量升高，GSH含量降低，YAP1、GPX4和SLC7A11表达下调，ACSL4表达上调(P<0.05)，肺组织内肺泡上皮细胞线粒体皱缩明显，线粒体嵴减少甚至消失。结论YAP1参与脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制，该作用与抑制铁死亡有关。

简介：摘要目的评价音猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路在睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只，4周龄，体重14~16 g，采用随机数字表法分为3组(n＝16)：对照组(C组)、睡眠剥夺组(SD组)和睡眠剥夺＋Shh激动剂SAG组(SD＋SAG组)。采用多平台水环境法制备小鼠睡眠剥夺模型，每天睡眠剥夺20 h，连续10 d。SD＋SAG组于每次造模前5 min腹腔注射SAG 10 mg/kg，C组和SD组腹腔注射等量生理盐水。造模结束后随机取10只小鼠行新物体识别和Y迷宫实验，行为学实验结束后处死小鼠取海马，采用高尔基染色法测定海马CA1区树突棘密度，采用Western blot法检测Gli1和脑源性神经营养因子(BDNF)表达，采用RT-qPCR法检测Gli1和BDNF的mRNA表达。结果与C组比较，SD组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度降低，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达下调(P<0.05)；与SD组比较，SD＋SAG组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度升高，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论Shh/Gli1信号通路抑制，降低海马神经元突触可塑性参与了睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍的过程。

简介：摘要目的探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法健康雄性SD大鼠40只，按照随机数表法随机分为5组，每组8只，假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后，用TTC染色法测心肌梗死面积；用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量；末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡；Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果与Sham组比较，I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bax表达上调，Bcl-2表达下调（P<0.05）；与I/R组比较，I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少，心肌p-Akt及Bcl-2表达上调，Bax表达下调（P<0.05）；与I/R+H组比较，I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bcl-2表达下调，Bax表达上调（P<0.05）。结论氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡，其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

简介：摘要目的评价艾司氯胺酮对大鼠脓毒症急性肾损伤(AKI)的影响及自噬在其中的作用。方法SPF级健康雄性成年SD大鼠40只，体重200~240 g，采用随机数字表法分为5组(n＝8)：对照组(Con组)、艾司氯胺酮组(Con+Ket组)、脓毒症组(LPS组)、脓毒症+艾司氯胺酮组(LPS+Ket组)和脓毒症+艾司氯胺酮+3-甲基腺嘌呤组(LPS+Ket+3MA组)。采用腹腔注射LPS制备脓毒症大鼠AKI模型，Con组腹腔注射生理盐水10 ml/kg；Con+Ket组腹腔注射生理盐水10 ml/kg，30 min后尾静脉注射艾司氯胺酮10 mg/kg；LPS组腹腔注射LPS 10 mg/kg；LPS+Ket组腹腔注射LPS 10 mg/kg，30 min后尾静脉注射艾司氯胺酮10 mg/kg；LPS+Ket+3MA组腹腔注射LPS 10 mg/kg，30 min后尾静脉注射艾司氯胺酮10 mg/kg和3-MA 15 mg/kg。腹腔注射LPS后24 h时麻醉大鼠，随后处死取肾组织，观察病理学结果，采用ELISA法测定核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、IL-1β和IL-18的含量，采用Western blot法检测LC3、P62和Beclin-1的表达。结果与Con组比较，LPS组肾组织病理学损伤评分、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18含量升高，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低，Beclin-1表达下调，P62表达上调(P<0.05)；与LPS组比较，LPS+Ket组肾组织病理学损伤评分、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18含量降低，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高，Beclin-1表达上调，P62表达下调(P<0.05)；与LPS+Ket组比较，LPS+Ket+3MA组肾组织病理学损伤评分、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18含量升高，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低，Beclin-1表达下调，P62表达上调(P<0.05)。结论艾司氯胺酮可减轻大鼠脓毒症AKI，自噬参与了这一过程，与抑制NLRP3炎症小体活化，降低炎症反应有关。

简介：摘要目的评价ErbB2相互作用蛋白(Erbin)在小鼠脓毒症相关性脑病(SAE)中的作用及其与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在其中的作用。方法SPF级健康雄性野生型C57BL/6小鼠和Erbin(-/-) C57BL/6小鼠各60只，8~10周龄，体重20~25g，采用随机数字表法分为4组(n＝30)：野生型假手术组(WT+Sham组)、野生型SAE组(WT+SAE)、Erbin(-/-)假手术组(EKO+Sham组)和Erbin(-/-)+SAE组(EKO+SAE组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠SAE模型。于造模后7 d时行旷场实验(移动总距离)，造模后8 d时行新物体识别实验(识别指数)，造模后10 d时行Morris水迷宫实验(目标象限停留时间)。于造模后24 h时处死小鼠取海马组织，采用HE染色观察海马组织病理学结果，并计数神经元，计算神经元存活率；采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达；采用免疫组化法计数NLRP3阳性细胞；采用ELISA法检测IL-1β、TNF-α和IL-18含量。结果与WT+Sham组比较，WT+SAE组目标象限停留时间缩短，识别指数和神经元存活率降低，海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高，NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05)；与EKO+Sham组比较，EKO+SAE组目标象限停留时间缩短，识别指数和神经元存活率降低，海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高，NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05)；与WT+SAE组比较，EKO+SAE组目标象限停留时间缩短，识别指数和神经元存活率降低，海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高，NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05)；4组移动总距离比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Erbin可通过抑制NLRP3炎症小体的活化，对SAE小鼠产生内源性保护作用。

简介：摘要目的评价发育期大鼠神经病理性痛诱发远期认知功能障碍时大脑前额叶皮层葡萄糖代谢的变化。方法SPF级健康雄性SD大鼠，4周龄，体重80~100 g，釆用坐骨神经选择性损伤法建立大鼠神经病理性痛模型。分别于造模前1 d(T0)和造模后1、3、7、14、28、42、56 d(T1~7)时测定术侧足机械缩足反应阈(MWT)。根据T5时与T0时MWT比较的结果，将大鼠分为神经病理性痛组(NP组)和非神经病理性痛组(NNP组)。T7时行旷场实验和新物体识别实验检测大鼠焦虑样行为和认知功能，采用PET/CT检测大脑前额叶皮层18氟-氟代脱氧葡萄糖标准摄取值，分别采用Western blot法和免疫荧光法检测前额叶皮层葡萄糖转运蛋白3表达水平。结果与T0时比较，NNP组T1~2时MWT降低，NP组T1~7时MWT降低(P<0.05)。与NNP组比较，NP组T1~7时MWT降低，T7时中央区停留时间缩短，新物体探索时间百分比降低，前额叶皮层18氟-氟代脱氧葡萄糖标准摄取值降低，葡萄糖转运蛋白3表达下调(P<0.05)。结论发育期大鼠神经病理性痛诱发远期认知功能障碍可能与大脑前额叶皮层葡萄糖代谢降低有关。

简介：摘要目的评价激活腺苷A2B受体对大鼠心肌缺血再灌注时自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在其中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠48只，体重220～280 g，采用随机数字表法分为4组(n＝12)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、腺苷A2B受体激动剂BAY 60-6583组(BAY组)和BAY 60-6583+PI3K抑制剂LY 294002组(BAY+LY组)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min、再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。BAY组于再灌注前5 min时腹腔注射BAY60-6583 1 mg/kg，BAY+LY组于再灌注前10 min时腹腔注射LY 294002 10 mg/kg，再灌注前5 min时腹腔注射BAY60-6583 1 mg/kg。于再灌注结束时，采用ELISA法检测血清LDH和CK-MB浓度，处死取心肌组织，采用伊文氏蓝、TTC双重染色法确定心肌梗死体积百分比，采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3 Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ、Beclin-1和磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平。结果与Sham组比较，I/R组血清LDH、CK-MB浓度和心肌梗死体积百分比升高，心肌p-Akt表达下调，Beclin-1和LC3Ⅱ表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。与I/R组比较，BAY组血清LDH、CK-MB浓度和心肌梗死面积百分比降低，心肌p-Akt表达上调，Beclin-1和LC3Ⅱ表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)，BAY+LY组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与BAY组比较，BAY+LY组血清LDH、CK-MB浓度和心肌梗死面积百分比升高，心肌p-Akt表达下调，Beclin-1和LC3Ⅱ表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。结论激活腺苷A2B受体可降低大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞自噬水平，机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

简介：摘要目的评价大麻素2型受体(CB2R)基因过表达与小鼠巨噬细胞焦亡的关系。方法利用慢病毒转染小鼠骨髓源性巨噬细胞，制备稳定细胞系：慢病毒LV5阴性对照细胞系LV5-NC、慢病毒LV5CB2R基因过表达细胞系LV5-CB2R-OE(OE)。采用随机数字表法将2种细胞系分别分为3组(n＝18)：对照组(LV5-NC-C组、OE-C组)、LPS/ATP组(LV5-NC-LPS/ATP组、OE-LPS/ATP组)和CB2R特异性激动剂HU308组(LV5-NC-HU308组、OE-HU308组)。对照组细胞正常培养，LPS/ATP组先加入终浓度为0.5 μg/ml LPS孵育5 h后，加入5 mmol/L的ATP孵育1 h。LPS/ATP+HU308组加入终浓度为0.5 μg/ml的LPS和10 μmol/L的HU308共孵育5 h，再给予浓度为5 mmol/L的ATP孵育1 h。采用RT-PCR法检测CB2R、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1和消皮素D(GSDMD)的mRNA表达，采用Western blot法检测caspase-1表达，釆用ELISA法检测培养液IL-18和IL-1β的浓度。结果2种细胞系中与对照组比较，LPS/ATP组NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA表达上调，IL-18和IL-1β浓度升高(P<0.05)；与LPS/ATP组比较，HU308组NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA表达下调，IL-18和IL-1β浓度降低(P<0.05)。V5-NC-C组与OE-C组比较、LV5-NC-LPS/ATP组与OE-LPS/ATP组比较、LV5-NC-HU308组与OE-HU308组比较，上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论CB2R基因过表达并不能有效抑制小鼠巨噬细胞焦亡的发生，只有激活CB2R才可抑制。

简介：摘要目的评价miR-146a在术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马炎症反应中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠160只，12～16周龄，体重22～28 g，采用随机数字表法分成5组(n＝32)：对照组(C组)、POCD组、miR-146a agomir组(Ag组)、miR-146a antagomir组(At组)和阴性对照液组(NC组)。采用吸入1.5%异氟烷麻醉下行胫骨骨折内固定术制备小鼠POCD模型。于术前2 d时，Ag组双侧海马注射miR-146a agomir 0.5 nmol (0.1 nmol/μl)，At组注射miR-146a antagomir 2.5 nmol (0.5 nmol/μl)，NC组注射miR-146a阴性对照液2.5 nmol (0.5 nmol/μl)；C组不行麻醉或手术处理。于术前1 d、术后1、3和7 d时行旷场实验评估小鼠自发活动能力，15 min后行条件恐惧实验评价认知能力，于术后1和3 d时处死小鼠取海马，采用免疫荧光染色法检测CA1区小胶质细胞激活标志物CD11b的表达，于术后6、12和24 h时采用qPCR法检测miR-146a的表达，Western blot法检测IRAK1、TRAF6、NF-κB p65和TNF-α的表达，采用ELISA法检测IL-1β和IL-6的含量。结果5组各时点旷场实验总探索路程及声音恐惧测试僵直时间百分比差异无统计学意义(P>0.05)。与C组比较，POCD组术后1、3和7 d时场景恐惧测试僵直时间百分比减少，术后1和3 d时海马CD11b表达、术后6、12和24 h时miR-146a、IRAK1、TRAF6、NF-κB p65和TNF-α表达上调，IL-1β和IL-6含量升高(P<0.05)；与NC组比较，Ag组术后1、3和7 d时场景恐惧测试僵直时间百分比升高，术后1和3 d时CD11b表达下调，术后6、12和24 h时miR-146a、IRAK1、TRAF6、NF-κB p65和TNF-α表达上调，IL-1β和IL-6含量减少，At组术后1、3和7 d时场景恐惧测试僵直时间百分比减少，术后1和3 d时CD11b表达上调，术后6、12和24 h时miR-146a表达下调，IRAK1、TRAF6和NF-κB p65表达上调，术后12和24 h时TNF-α表达上调，IL-1β和IL-6含量升高(P<0.05)。结论miR-146a参与了POCD小鼠海马炎症反应的过程，机制可能与其抑制IRAK1-TRAF6-NF-κB信号通路有关。

简介：摘要目的评价术后谵妄大鼠血脑脊液屏障的变化。方法SPF级健康雌性SD大鼠147只，3月龄，体重240～300 g，采用随机数字表法分成3组(n＝49)：对照组(C组)、单纯麻醉组(A组)和术后谵妄组(P组)。C组大鼠不接受麻醉和手术处理，A组大鼠接受1.4%异氟烷麻醉2 h处理，P组大鼠在1.4%异氟烷麻醉下行剖腹探查术。于术前24 h、术后6、9和24 h时测试大鼠行为学(埋藏食物实验、旷场实验及Y迷宫实验)；术后6、9和24 h于大鼠尾静脉注射荧光素钠(NaFI)后取大鼠双侧侧脑室脉络丛(CP)及脑脊液(CSF)，采用Western blot法检测CP ZO-1、occludin、claudin1、E-cadherin和VE-cadherin表达；术后6 h时大鼠尾静脉注射10、40和70 kDa FITC-dextran后取CSF，通过荧光分光光度法检测CSF NaFI，10、40和70 kDa FITC-dextran的浓度；取CP在透射电镜下观察大鼠双侧CP上皮细胞(CPECs)形态。结果与C组和A组比较，P组大鼠术后食用麦片潜伏期延长，中央格停留时间缩短，进入新异臂次数百分比及新异臂停留时间百分比降低，僵直时间缩短，大鼠CP ZO-1、occludin和claudin1表达下调，CSF NaFI浓度、10及40 kDa FITC-dextran浓度增加(P<0.05或0.01)，CPECs排列紊乱疏松，微绒毛缺失，细胞间紧密连接局部模糊不清，间隙增宽。结论术后谵妄的发生与血脑脊液屏障的变化有关。

简介：摘要目的评价丙戊酸对神经病理性痛大鼠额叶皮层M1/M2型小胶质细胞表达的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠36只，6～7周龄，体重200～230 g，采取随机数字表法分为3组(n＝12)：假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和丙戊酸组(V组)。采用L5脊神经结扎(SNL)法制备大鼠神经病理性痛模型。V组于SNL后即刻和结扎后每天腹腔注射丙戊酸300 mg/kg，1次/d，连续3 d。S组和NP组每天腹腔注射等容量生理盐水。于SNL前、SNL后1、3、7、14、21和28 d时测定机械缩足反应阈(MWT)；于SNL后28 d行糖水偏好实验和强迫游泳实验。行为学测定结束后处死大鼠，取前额叶皮层组织，采用Western blot法检测CD16和CD206的表达，计算CD206/CD16比值。结果与S组比较，NP组SNL后各时点MWT和糖水偏好率降低，强迫游泳不动时间延长，额叶皮层CD16和CD206表达上调，CD206/CD16比值降低(P<0.05)；与NP组比较，V组SNL后各时点MWT和糖水偏好率升高，不动时间缩短，额叶皮层CD16表达下调，CD206表达上调，CD206/CD16比值升高(P<0.05)。结论丙戊酸改善神经病理性痛大鼠抑郁情绪的机制可能与促进额叶皮层M2型小胶质细胞表达，抑制M1型小胶质细胞表达有关。

简介：摘要目的构建大鼠RNAi-腺苷A2a受体(A2aR)慢病毒载体并进行鉴定。方法首先构建3对短发夹RNA(shRNA)-A2aR序列(shRNA-A2aR 1、shRNA-A2aR 2、shRNA-A2aR 3)，在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链shRNA oligo，shRNA慢病毒重组质粒构建成功后，将重组质粒、包装载体、穿梭载体共转染293T细胞，从而获得病毒液。实验Ⅰ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为3组(n＝6)：空载组(V组)、shRNA-A2aR 1组和shRNA-A2aR 3组，各组分别转染MOI为10的相应病毒液，转染48 h时，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率，以筛选最佳慢病毒载体。实验Ⅱ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为5组(n＝36)：空载组(V组)、MOI5组、MOI10组、MOI15组和MOI20组，各组分别转染相应MOI的病毒液(最佳慢病毒载体)，于转染24、48和72 h时，采用CCK-8法测定细胞存活率，荧光显微镜下观察细胞活力和细胞死亡情况，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率。结果实验Ⅰ　成功构建了2种shRNA-A2aR慢病毒载体(shRNA-A2aR 1、3)。shRNA-A2aR 3病毒液滴度为3.5×108 TU/ml。与V组和shRNA-A2aR 1组比较，shRNA-A2aR 3组心肌细胞A2aR表达下调(P<0.01)，shRNA-A2aR 3慢病毒载体干扰效率73%。实验Ⅱ　选择shRNA-A2aR 3慢病毒载体转染24 h时，各组细胞存活率均>85%；转染48 h时，MOI5组和MOI10组细胞存活率>80%；转染72 h各组细胞存活率<70%。倒置荧光显微镜下可见，MOI5组荧光密度稍低，MOI10组转染48 h及MOI20组转染24 h时，荧光密度较高且细胞状态较好；转染72 h时各组心肌细胞活力明显下降、死亡细胞增加。Western blot显示：MOI10组转染48 h、MOI15组转染48 h、MOI20组转染24和48 h时干扰效率均>70%。结论成功构建了大鼠shRNA-A2aR慢病毒载体，且MOI为10、转染48 h或MOI为20、转染24 h为最佳转染方案。

简介：摘要目的评价大鼠炎性痛形成时脊髓神经元P2X7受体与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/IL-1β信号通路的关系。方法SPF级健康成年雄性Wistar大鼠，体重180～220 g，取鞘内置管成功的大鼠40只，采用随机数字表法分为5组(n＝8)：对照组(CON组)、炎性痛组(IP组)、炎性痛＋二甲基亚砜组(IP-DMSO组)、炎性痛＋P2X7受体拮抗剂A740003组(IP-A组)和炎性痛＋P2X7受体激动剂ATP组(IP-ATP组)。采用右后足踝关节腔内注射完全弗氏佐剂50 μl的方法制备炎性痛模型，CON组于右后足踝关节腔内注射等容量生理盐水。于造模前1 d、造模后即刻、1、2和3 d时，IP-DMSO组鞘内注射1%二甲基亚砜10 μl，IP-A组鞘内注射A740003 0.1 nmol(溶于10 μl二甲基亚砜中)，IP-ATP组鞘内注射ATP 150 nmol(溶于10 μl二甲基亚砜中)。于造模后3 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。采用ELISA法检测右后足踝关节组织前列腺素E2(PGE2)含量和脑脊液IL-1β浓度。然后处死大鼠，取L4-6脊髓组织，采用Western blot法检测NLRP3、casepase-1和IL-1β的表达，采用免疫荧光法检测P2X7与神经元特异性核蛋白(NeuN)、NLRP3与NeuN的共表达情况。结果与CON组比较，IP组关节组织PGE2含量升高，其余4组MWT降低，TWL缩短，脑脊液IL-1β浓度升高，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达上调(P<0.05)；与IP组比较，IP-A组MWT升高，TWL延长，脑脊液IL-1β浓度降低，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达下调，IP-ATP组MWT降低，TWL缩短，脑脊液IL-1β浓度升高，脊髓NLRP3、caspase-1和IL-1β表达上调(P<0.05)，IP-DMSO组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。脊髓P2X7与NeuN存在共表达，NLRP3与NeuN存在共表达。结论脊髓神经元P2X7受体可通过激活NLRP3/IL-1β信号通路，参与了大鼠炎性痛的形成。

简介：摘要目的探讨盐酸羟考酮预先给药对大鼠大脑中动脉栓塞所致局灶性脑缺血-再灌注损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠72只，体质量200~250 g，随机（随机数字法）分为三组（每组24只）：假手术组（Sham组）、局灶性脑缺血-再灌注组（I/R组）和盐酸羟考酮预处理组（Oxy组）。采用大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型，阻断2 h恢复再灌注。Oxy组于脑缺血前5 min经尾静脉注射盐酸羟考酮0.5 mg/kg，Sham组和I/R组则给予等容量生理盐水1 mL。再灌注24 h行神经功能缺陷评分（NDS）；然后处死大鼠，取脑组织，测定缺血侧脑含水量，采用2，3，5-氯化三苯四唑（TTC）染色，计算脑梗死体积百分比；苏木精-伊红（HE）染色观察脑组织病理变化；ELISA法检测缺血侧脑皮质中的TNF-α、IL-1β和IL-10水平；Western blot检测脑组织NF-κB的表达水平；比色法检测脑组织髓过氧化物酶（MPO）活性。应用SPSS 20.0软件进行统计分析，计量资料多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果与Sham组比较，I/R组和Oxy组NDS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比和细胞坏死率显著增加（均P<0.05）；脑皮质中TNF-α、IL-1β、IL-10、NF-κB和MPO表达水平明显升高（均P<0.05）。Oxy组与I/R组相比，NDS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比和细胞坏死率明显减少[（1.7±0.9） vs （2.6±1.1）；（79.2±2.4）% vs（84.7±4.2）%；（23.0±5.4）% vs （34.8±6.0）%；（25.2±12.4）% vs（54.8±14.8）%，均P<0.05]；脑皮质中TNF-α、IL-1β含量、NF-κB相对表达及MPO活性明显降低[（4.4±1.2） pg/mg vs （6.5±1.2） pg/mg；（5.4±0.7）pg/mg vs（7.8±0.8）pg/mg；（0.83±0.11） vs （1.23±0.33）；（0.27±0.09）U/g vs（0.36±0.14）U/g，均P<0.05]，抗炎因子IL-10水平显著升高[（20.9±4.5） pg/mg vs （9.2±1.6） pg/mg，t=6.036，P=0.000 1]。结论盐酸羟考酮预先给药可明显减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注导致的脑损伤,其机制可能与抑制NF-κB的表达，减轻炎症反应有关。

简介：摘要目的观察鸢尾素后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响并探讨其机制。方法健康雄性SD大鼠(武汉大学实验动物中心提供)36只，采用随机数字表法分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和鸢尾素组(Ir组)，每组12只。IR组和Ir组大鼠采用夹闭左、中叶肝蒂建立大鼠肝脏70%缺血再灌注模型(缺血60 min，再灌注6 h)；Ir组于灌注开始时静脉注射鸢尾素10 μg/kg；S组仅游离肝脏周围血管及韧带。再灌注6 h后下腔静脉采血并留取肝脏组织标本。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及肝脏组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量；苏木精-伊红(HE)染色，光镜观察肝脏组织病理学的变化。用蛋白质印迹法检测磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)和磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)的表达水平及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3含量。采用SPSS软件对3组大鼠肝脏指标进行方差分析，并进行两两比较。结果与S组比较，IR组肝脏组织病理学损伤较重；S组、I/R组和Ir组的ALT含量分别为(75.24±2.65)、(705.33±4.02)、(385.46±3.58) U/L；AST含量分别为(122.33±6.76)、(1 357.54±5.23)、(738.26±3.98) U/L；IL-6含量分别为(104±16)、(586±86)、(275±35) ng/L；TNF-α含量分别为(92±10)、(1 165±102)、(511±73) ng/L；IL-1β含量分别为(98±12)、(610±79)、(312±41) ng/L；MDA含量分别为(174±38)、(1 900±460)、(1 055±266) ng/L；SOD含量分别为(124±10)、(46±8)、(70±10) ng/L；GPX含量分别为(106±12)、(42±5)、(62±11) ng/L；Caspase-3含量分别为(0.22±0.06)、(0.86±0.14)、(0.57±0.11) ng/L；p-JAK2含量分别为0.44±0.05、0.91±0.07、0.62±0.11；p-STAT3含量分别为0.35±0.04、0.86±0.08、0.57±0.07。I/R组及Ir组大鼠血清ALT、AST、IL-6、TNF-α、IL-1β及肝组织MDA、Caspase-3升高(t＝445.551、219.362、21.700、7.700、36.182、14.132、24.191、10.111、13.753、7.023、14.456、6.556，P<0.01)，差异有统计学意义，SOD和GPX含量降低(t＝20.374、14.104、15.945、10.965，P<0.01)，差异有统计学意义，JAK2和STAT3磷酸化上调(t＝14.289、5.479、19.054、8.224，P<0.01)，差异有统计学意义；与IR组比较，Ir组大鼠肝脏损伤减轻，ALT、AST、IL-6、IL-1β、TNF-α下降(t＝226.183、14.000、14.081、22.052，P<0.01)，差异有统计学意义，肝组织MDA和Caspase-3浓度降低(t＝6.730、7.906，P<0.01)，差异有统计学意义，SOD和GPX浓度升高(t＝6.274、4.985，P<0.01)，差异有统计学意义，JAK2和STAT3磷酸化下调(t＝8.819、10.834，P<0.01)，差异有统计学意义。结论外源性鸢尾素后处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制JAK2/STAT3表达，减轻氧化应激，减少细胞凋亡有关。

简介：摘要目的评价大麻素2型受体(CB2R)在脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。方法常规培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，采用随机数字表法分为3组(n＝18)：对照组(C组)、LPS组(LPS组)和CB2R激动剂HU308组(HU308组)。C组细胞不给予药物处理，余2组加入LPS，终浓度为1 μg/ml，孵育15 min时HU308组加入HU308，终浓度为10 μmol/L继续孵育6 h。采用RT-PCR法检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1、caspase-11和消皮素D(GSDMD)的mRNA表达，采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD及其C末端(GSDMD-C)表达，计算GSDMD-C/GSDMD比值，采用ELISA法检测培养液IL-18和IL-1β的浓度。结果与C组比较，LPS组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达上调，GSDMD-C/GSDMD比值升高，培养液IL-18和IL-1β浓度升高(P<0.05)；与LPS组比较，HU308组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达下调，GSDMD-C/GSDMD比值降低，培养液IL-18和IL-1β浓度降低(P<0.05)。结论CB2R参与了LPS诱导巨噬细胞焦亡的过程。

简介：摘要目的评价七氟烷致老龄小鼠认知功能减退时组蛋白乙酰化与含2B亚基的NMDA受体(NR2B)-环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的关系。方法SPF级雄性C57BL/6J小鼠48只，22月龄，体重32～40 g，采用随机数字表法分为4组(n＝12)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)、二甲基亚砜＋七氟烷组(DS组)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺它(SAHA)＋七氟烷组(SS组)。C组吸入100%氧气2 h，S组、DS组、SS组吸入3.0%七氟烷2 h，七氟烷吸入结束后24 h行Morris水迷宫实验(共6 d)。于七氟烷麻醉前2 h以及每天水迷宫实验前2 h，SS组腹腔注射SAHA 50 mg/kg，DS组腹腔注射等容量二甲基亚砜。水迷宫实验后立即处死小鼠取海马组织，采用Western blot法检测胞核乙酰化-H3以及胞浆NR2B、磷酸化CREB(p-CREB)、BDNF的表达水平。采用RT-PCR法检测NR2B和BDNF的mRNA表达水平。结果与C组比较，S组、DS组和SS组逃避潜伏期延长，目标象限停留时间百分比降低，乙酰化-H3、NR2B、p-CREB、BDNF、NR2B mRNA和BDNF mRNA表达下调(P<0.05)；与S组或DS组比较，SS组逃避潜伏期缩短，目标象限停留时间百分比升高，乙酰化-H3、NR2B、p-CREB、BDNF、NR2B mRNA和BDNF mRNA表达上调(P<0.05)；S组与DS组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论组蛋白乙酰化可通过调控NR2B-CREB-BDNF信号通路表达，参与七氟烷致老龄小鼠认知功能减退的病理生理机制。