简介：无

简介：摘要目的制备GII.3[P12]型人源诺如病毒(human norovirus, HuNoV)广州株GZ2013-L20的病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)和多克隆抗体，系统表征其免疫原性特征和受体结合能力，为HuNoV防控提供数据支撑。方法以GZ2013-L20毒株基因组为模板，扩增ORF2并构建重组转座载体，转化至大肠埃希菌DH10Bac获得重组杆状病毒质粒Bacmid-L20-ORF2，在昆虫细胞sf9中表达目的VLP，采用透射电镜、SDS-PAGE、Western blot(WB)和受体结合实验等方法对纯化后VLP进行鉴定。此外，将VLP免疫小鼠获得多克隆抗体，通过间接ELISA和受体结合阻断试验进行评价。结果构建了重组杆状病毒Bacmid-L20-ORF2，并成功获得目的毒株VLP；透射电镜显示颗粒直径约为30 nm；SDS-PAGE和WB结果显示蛋白相对分子质量(Mr. ×103)约58；受体结合实验表明，目的VLP与分泌型唾液受体(A型、B型、AB型和O型)、O型非分泌型唾液受体以及猪胃黏蛋白均能有效结合；VLP多克隆抗体效价达到2×105，且与20种(20/28)基因型HuNoV的衣壳蛋白具有交叉免疫反应；受体结合阻断实验显示，多克隆抗体仅对同型VLP具有中和阻断效果，而对GII.2、GII.4、GII.8和GII.17等基因型VLP没有中和作用。结论GII.3[P12]型HuNoV广州株VLP与分泌型和非分泌型唾液受体均呈现较强的结合能力，其多克隆抗体具有免疫结合广谱性，但中和阻断效果仅对同型病毒有效，其结果为疫苗研发的理性设计提供基础数据。

简介：摘要目的建立诺如病毒原型株诺瓦克病毒（Norwalk virus，NV）P蛋白细菌细胞表面展示体系，并对其进行功能评价。方法构建pET28a-inaQn-TB-P(GI.1)重组质粒，并在大肠杆菌中进行诱导表达，建立升级版假NV。以猪胃粘膜提取物中已知NV受体组织血型抗原（human histo-blood group antigens，HBGAs）为对象，验证假病毒特异性识别、捕获HBGAs的能力；以生菜叶中类HBGAs为对象，验证升级版假NV捕获生菜叶中NV配体的特性，并对所捕获的配体进行初步分析。结果获得可高效捕获NV受体/配体的假病毒体系，该体系可特异性识别并捕获猪胃粘膜提取物中A型HBGA和生菜中类HBGAs。另外，所捕获生菜中类HBGAs可以分别被A、H和Lewis a型HBGA单克隆抗体识别，且以H型HBGA抗原位点暴露最多。结论本研究成功建立了NV的P蛋白细菌细胞表面展示体系，可以识别并捕获HBGAs及其类似物，为解析NV与配体互作机制提供技术平台。

简介：摘要目的建立基于原位捕获反转录实时定量PCR方法（in situ capture real time quantitative reverse transcription PCR，ISC-RT-qPCR）检测感染性A组轮状病毒（group A rotavirus，RVA）的体系，并对其进行评估。方法以自行构建的NSP3重组质粒为对象，绘制标准曲线；通过优化ISC-RT-qPCR体系中猪胃粘膜提取物（porcine gastric mucin，PGM）包被浓度、孵育时间、孵育缓冲液pH和封闭时间的参数，建立、完善RVA的ISC-RT-qPCR检测体系，并评估该体系的特异性、检测限及稳定性。结果ISC-RT-qPCR最佳试验参数分别为：PGM包被浓度为1.0 mg/mL、孵育时间为60 min、孵育pH为9.0、封闭时间为60 min；体系的检测限约为5拷贝/mL，检测特异性强、稳定性好。结论本研究所建立的ISC-RT-qPCR是一种可用于检测感染性RVA的方法，具有操作简单、绿色环保、可高通量检测等优点，适合于临床、尤其是低病毒载量的食品和环境样品中RVA的快速检测。