简介：摘要目的探讨食管鳞状细胞癌相关长链非编码RNA（lncRNA）ESCCAL-1对THP-1细胞源性巨噬细胞极化的影响。方法将食管癌细胞株KYSE450分为5组：KYSE450组（正常KYSE450细胞）、shRNA-ESCCAL-1组（感染敲除ESCCAL-1慢病毒）、shRNA-NC组（感染干扰对照慢病毒）、OE-ESCCAL-1组（感染过表达ESCCAL-1慢病毒）和OE-NC组（感染过表达对照慢病毒）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ESCCAL-1的表达。各组细胞与THP-1细胞源性巨噬细胞共培养后，采用流式细胞术检测THP-1细胞源性巨噬细胞M1极化标志物HLA-DR、iNOS、CD86和M2极化标志物Arg-1、CD163、CD206的表达及炎性因子的表达。结果THP-1细胞经100 ng/ml佛波酯刺激48 h后，细胞呈贴壁生长，CD11b和CD36表达水平均升高，表明THP-1细胞成功分化为巨噬细胞。THP-1细胞源性巨噬细胞与经不同处理的食管癌KYSE450细胞株共培养24 h后，shRNA-ESCCAL-1组与shRNA-NC组相比、OE-ESCCAL-1组与OE-NC组相比，M1极化标志物HLA-DR、iNOS、CD86表达差异均无统计学意义（均P>0.05）。与shRNA-NC组相比，shRNA-ESCCAL-1组M2极化标志物Arg-1、CD163、CD206表达均下降[8.54±0.29比11.83±0.69，12.0±0.3比24.5±0.8，2.05±0.23比14.54±1.10]，差异均有统计学意义（t值分别为7.64、27.38、19.31，均P<0.01）；与OE-NC组相比，OE-ESCCAL-1组M2极化标志物Arg-1、CD163、CD206表达均升高[32.60±1.14比14.20±0.20，43.7±1.5比25.1±1.2，35.8±0.7比13.6±0.6]，差异均有统计学意义（t值分别为-27.58、-17.24、-43.98，均P<0.01）。与shRNA-NC组相比，shRNA-ESCCAL-1组干扰素γ表达水平降低[（6.3±1.5）pg/ml比（20.0±2.6）pg/ml，t=7.75，P=0.001]；与OE-NC组相比，OE-ESCCAL-1组白细胞介素1RA表达水平升高[（3 167±306）pg/ml比（467±176）pg/ml，t=-13.27，P<0.01]。结论食管鳞状细胞癌相关lncRNA ESCCAL-1可以促进巨噬细胞转化为M2表型。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对SAP患者树突状细胞(DCs)成熟、分化的作用及参与炎症调节的机制。方法采集郑州大学附属郑州中心医院行剖宫产的足月胎儿脐带4～5 cm，原代分离培养hUC-MSCs，采用流式细胞术进行表型鉴定和成脂、成骨染色。采集5例SAP患者外周血20 ml，采用淋巴细胞分离液分离出单核细胞，以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)进行诱导培养出DCs，根据培养方式不同分为DCs组、hUC-MSCs+DCs组、hUC-MSCs+DCs+NS398组(NS398为NF-κB下游调控基因COX-2的特异性抑制剂)。应用流式细胞术检测DCs表型，测定细胞培养24 h上清液中的IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-6 、IL-10水平。采用蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)、IKKα及NF-κB-p65蛋白表达量。结果成功培养出hUC-MSCs，其表面标志物CD90、CD105、CD73表达阳性，并可向脂肪细胞、骨细胞分化。随着培养时间延长，DCs由未成熟向成熟分化。与DCs组比较，hUC-MSCs+DCs组的调节性DCs(regDCs)比例增加，其标志物CD11b显著上调[ (14.26±1.25)%比(4.87±0.58)%]，CD1a 、CD11c显著下调[(2.81±0.34)%比(13.62±1.52)%、(3.88±0.5)%比(11.8±1.22)%]，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。培养上清液IL-1β、INF-γ、IL-6表达下调，但差异无统计学意义；而促炎因子IL-1α显著降低[(14.91±2.58)ng/L比(30.19±7.75)ng/L]，抑炎因子IL-10显著升高[(17.03±4.69)ng/L比(1.83±0.14)ng/L]。NF-κB-p65、TLR4蛋白表达显著下调(0.74±0.02比0.97±0.01、0.89±0.01比1.72±0.01)，IKKα蛋白表达显著上调(1.12±0.01比0.21±0.01)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与DCs组及hUC-MSCs+DCs组比较，hUC-MSCs+DCs+NS398组的NF-κB-p65与TLR4表达量显著下调(0.34±0.01比0.97±0.01、0.74±0.02，0.14±0.01比1.72±0.01、0.89±0.01)，而IKKα蛋白表达显著上调(1.68±0.01比0.21±0.01、1.12±0.01)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论hUC-MSCs能够抑制SAP患者DCs成熟、分化，并诱导出CD11bhigh CD1alow CD11clow的regDCs参与免疫调节，其机制可能通过TLR4/IKKα/NF-κB/COX-2途径抑制炎症级联反应，发挥抗炎作用。