水提取不同时间鲜红天麻有效成分的测定

赵梅梅,,滕朋朋,,杜漠,,杨晓凤

摘要：目的：测定陕产新鲜红天麻水煎煮不同时间下有效成分含量的变化。方法：对陕产新鲜红天麻分别水提取30，60，90，120，180， 210，240min，采用HPLC法对红天麻水煎液的有效成分进行测定。结果：天麻素和对羟基苯甲醇在120-180分钟的含量最高。结论：在日常烹饪以及临床鲜用药材时，要注意煎煮的时间，以防止有效成分的大量损失，影响药效。

关键词：红天麻；高效液相色谱；天麻素；对羟基苯甲醇

    鲜红天麻（Gastrodia elata），又名赤箭；为兰科，属多年生草本植物。鲜红天麻辛温，味甘。具有治疗惊风、神志昏迷、提气益神的功效[1]。可以防治头昏、眩晕、偏头痛、小儿惊风、风寒湿痹等症状[2]。经科学研究证实，天麻素具有治疗神经衰弱、偏头痛、眩晕症等作用[3]；对羟基苯甲醇具有抗炎、抗氧化和抑制肿瘤生长的作用[4]。目前鲜红天麻在全国大部分地区均有分布，贵州，云南，四川，陕西等地为重点生产鲜红天麻的区域[5]。

2018年我国国家健康委员会已将天麻列入药食同源目录，成为法定意义上的“药食两用”品种。鲜品天麻逐渐走入家庭日常食疗佳品。常见的有炖鸡、煮汤等烹饪方式。鲜红天麻中的化学成分含有香荚醇、天麻素，这两类化学成分都属于挥发类成分，遇到高温极其容易挥发[6]。鲜品红天麻的最佳煎煮时间则是需要探讨的问题。

1.仪器与试药

岛津LC-2030液相色谱仪（日本岛津）；KH － 300DB 型数控超声清洗器( 昆山禾创超声仪器有限公司)；BS210S万分之一天平( 德国 Sartorius有限公司) 。对照品天麻素、对羟基苯甲醇均购自阿拉丁试剂公司。水为超纯水，其他试剂为分析纯。鲜红天麻购自陕西宁强县。

2.方法与结果

2.1 色谱条件 Dikmatech Platisil C18色谱柱（250，5μm），以乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为流动相；检测波长为220 nm；柱温25℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL。

2.2 对照品配制

取天麻素对照品、对羟基苯甲醇对照品适量，精密称定，加乙腈-水（3∶97）混合溶液制成每1ml含天麻素500μg、对羟基苯甲醇100μg的混合对照品溶液。

2.3 天麻的水煎液配制

将鲜红天麻切丝，分别称取15g鲜红天麻，共21份。将每份眼样品置于圆底烧瓶中，倒入150ml水，进行加热回流提取 ，提取时间分别为30，60，90，120，180， 210 min和240min，回流提取结束后，将提取液过滤，并用水洗涤残渣，均补足液体至160ml，得到滤液。

2.4 供试品制备

精密地吸入鲜红天麻水煎液样品5ml；用微孔滤膜进行过滤，得到滤液备用。

2.5 方法学考察

2.5.1 系统适用性试验

将对照品与供试品的对照品按照“2. 1”的色谱方法进行含量分析。研究表明，各指标成分色谱峰保留时间适中，基本稳定，分离程度都在1.5以上，各色谱峰分离良好。

 

图1 鲜红天麻水煎液HPLC图

2. 5.2 精密度试验

取“2..2”项下对照品溶液10μL，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，记录色谱图并得到峰面积，得到天麻素峰面积对应的RSD值为0.539%，对羟基苯甲醇峰面积的RSD值为0.587%，结果表明仪器进样精密度良好。

2. 5.3 稳定性试验

取“2.4”项下对天麻提取物供试样品溶液，分别0,2,4,8,12,24小时后分别进行了检测，并记录色谱图峰面积，得到天麻素和对羟基苯甲醇的RSD分别为0.424%和0.903%，试验表明，样品溶液中天麻素和对羟基苯甲醇在24 h内稳定。

2. 5.4 重复性试验

精密量取“2.4”项下30min提取的样品，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，记录色谱图并得到峰面积，RSD值分别为0.700%和0.769%。结果表明该方法的重复性良好。

2.5.5加样回收率试验

精密量取6份已知浓度的的天麻水煎液1ml，并添加天麻素和对羟基苯甲醇混合对照品溶液1ml，按照“2.1”项色谱条件下进样，记录色谱图并得到峰面积。算的总回收率为99.75%和98.97%。

2.6 标准曲线的确定

从“2.2”的标准溶液各移取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mL，置10 mL容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）稀释到刻度，然后摇晃，得到不同浓度标准溶液。按照按照“2.1”项色谱条件下进样，记录色谱图并得到峰面积。用峰面积进行回归，得到了天麻素的回归公式Y=18528X +25228,（R=0.9999）；对羟基苯甲醇的回归公式为： Y=114241X-21343,（R=0.9994）。结果表明：在该色谱条件下，天麻素在0.01~0.5mg/ml以及对羟基苯甲醇在0.01~0.1mg/ml呈良好的线性关系。

2.7样品测定

精密吸取不同水提取时间下的各供试品溶液，进样10μL，按照“2.1”项下进行测定，得到天麻素和对羟基苯甲醇的含量。不同水提取时间下鲜红天麻的有效成分含量变化趋势见下图所示。随着煎煮时间的延长，天麻素的煎出量逐渐增大，在120分钟达到最高，之后就呈下降趋势。水提液中，对羟基苯甲醇的煎出量变化不大，在最开始提取30分钟时含量最高，之后呈下降趋势，在提取60分钟以后含量逐渐增加，在180分钟以后呈下降趋势。

图2 鲜红天麻水提取不同时间有效成分含量变化

3 讨论

本实验考察了鲜红天麻在水提取条件下的有效成分含量的变化，天麻素和对羟基苯甲醇在120-180分钟的含量最高。因此，在日常烹饪以及临床鲜用药材时，要注意煎煮的时间，以防止有效成分的大量损失，影响药效。

参考文献

[1]《中华本草》编委会.中华本草[M].国家中医药管理局,1999:7856.

[2]韩大荣. 天麻研究新进展[J]. 中国处方药, 2018, 16(04): 19-21.

[3] 刘天睿, 陈向东, 王忠巧, 张薇薇, 宋明海, 徐万雷, 兰进. 天麻研究进展及产业发展建议[J]. 中国现代中药, 2020, 22(04): 647-651.

[4]岑信钊.天麻的化学成分与药理作用研究进展[J].中药材,2005(10):99-103.

[5] 刘大会.天麻道地产区的形成与变迁[J].中国中药杂志,2017,42(18):3639.

[6]李燕,谢淼,邵明莎,翟庆超,魏英勤,赵海军,季旭明,王世军.近10年来天麻的药理作用及化学成分研究进展[J].中华中医药学刊,2017,35(12):2987-2993.

基金项目：陕西国际商贸学院校级科研项目“陕产天麻的食品标准研究”（SMXY202123），陕西国际商贸学院“秦药团队”资助项目

作者简介：赵梅梅（1992-），女，硕士，讲师，研究方向：药物分析。