微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证结果分析

杨丽雯,陈旭煜*,赖瑞英,张卉

摘要：能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力具有重要意义。本文通过对此次能力验证的整个实验过程进行回顾，对“人、机、料、法、环”五个方面进行质量控制分析，通过分析总结实验室的优势及不足，充分发挥优势改正不足，以提高实验室的检测能力和管理水平，增强政府监管部门的公信力。

关键字：需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数能力验证结果分析

1  前言

能力验证是检验检测实验室认可活动中不可缺少的一项重要内容，不仅是针对个别检验项目的考核，同时是对整个机构质量管理体系运行情况的考核[1]，药品检验检测能力验证不仅能考核本实验室的药品检验技术，更能提高本实验室药品检验的技术能力，增强各级监管部门对本实验室能力的信任度[2]。

本实验组人员参加了2022年由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的ACAS-PT1396(2022)非无菌产品微生物限度检查：微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证。本文旨在回顾梳理实验过程，总结本次实验结果，为健全完善微生物检验内部质量控制管理体系提供理论和实践参考[2]。

2  实验试剂耗材、仪器及方法

2.1 样品

样品来源于中国检验检疫科学研究院测试评价中心，需氧菌总数计数样品编号为22-E290、22-X687；霉菌和酵母总数计数样品编号为22-D950、22-J547，为药品制剂的冷冻干燥物，采用玻璃西林瓶密封包装，瓶身贴有编号标识。收到样品后立即置于4 ℃冰箱保存，并尽快安排实验。

2.2 试剂及耗材

PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，厂家：广东环凯，批号：1091711；胰酪大豆胨液体培养基，厂家：广东环凯，批号：1095011；沙氏葡萄糖琼脂培养基，厂家：广东环凯，批号：1103691；一次性无菌培养皿，广东环凯，规格：90 mm×15 mm ；实验用水均为无菌用水。

2.3  仪器设备

生化培养箱，型号：SPX-250BX，厂家：天津市泰斯特仪器有限公司；生化培养箱，型号：LRH-250F，厂家：上海齐欣科学仪器有限公司；生物安全柜，型号：BSC-1300ⅡA2，厂家：苏州安泰空气技术有限公司。

2.4  实验方法

2.4.1检测方法

按照《中国药典》2020版四部通则1105非无 、菌产品微生物限度检查：微生物计数法   平皿法[3]和ACAS-PT1396(2022)非无菌产品微生物限度检查：微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证参考指导书。

2.4.2实验步骤

将样品放至室温，用酒精擦拭瓶身后，小心打开西林瓶盖，向瓶内缓缓加入20 mL无菌水复溶，待充分溶解后作为供试品原液。依照此方法处理其余3份样品。

用移液管吸取上述待测供试品10.00mL，置装有 90.00mL PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，混匀，作为1: 10供试液；取1:10供试液1.00 mL至9.0 0mLPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，混匀，作为1: 100供试液;依次稀释1:1000 、1:10000 供试液。

取各供试液1.00mL注入1个平皿中，平行制备至少2个平皿，注入胰酪大豆胨琼脂培养基（霉菌和酵母菌总数注入沙氏葡萄糖琼脂培养基），需氧菌总数在33.0 ℃培养3天（霉菌和酵母菌总数在23.0 ℃培养5天 ）。阴性对照：吸取1 .00mL PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，加入到无菌培养皿中，依法操作。用以此方法，处理其余3份样品。

2.4.3 计数与报告

按照 《中国药典》2020 年版四部通则及本次实验作业指导书，在方法规定的时间内对四个样品进行结果观察。

其中阴性对照试验无菌落生长，说明试验过程中无污染，试验结果有效。四个样品1∶10稀释度上菌落数均多不可及，其余同一稀释度平板的菌落总数相近，说明试验平行性较好好，结果准确。最终对22-E290样品选取1∶1 00稀释度进行报送， 结果为8.3×103CFU/mL；对22-X687样品选取1∶100稀释度进行报送，结果为3.9×103CFU/mL；对22-D950样品选取1∶100稀释度进行报送，结果为8.3×103CFU/mL；对22-J547样品选取1∶100稀释度进行报送，结果为7.0×103CFU/mL。

3  能力验证结果与分析

本实验室7月收到中国检验检疫科学研究院测试评价中心能力验证结果报告通知单，见表1。按照│z│≤ 2 为满意结果，2<│z│≤ 3 为可疑结果，│z│>3 为不满意结果，从表中得知本实验室四个样品结果均为满意。

表1能力验证评价表

项目	样品编号	实验结果	Z值
需氧菌总数计数	22-E290	8.3×103	-0.5
	22-X687	3.9×103	0.9
霉菌和酵母菌总数	22-D950	8.3×103	0.2
	22-J547	7.0×103	-0.1

4  能力验证结果质量控制分析

4.1  人员

此次参与能力验证实验的检验人员均经过上岗培训并取得药品微生物上岗资格证，有多年微生物检验工作经验，以保证整个实验过程的顺利完成。

4.2  设备

此次能力验证所用的培养箱由钦州市检验检测中心进行校准，在使用前实验人员对培养箱的使用温度进行校正，以保证实验温度达到实验要求。

4.3 试剂耗材

此次能力验证所用的培养基，均在购入后均进行验收且合格。实验前根据培养基配制要求进行配制。实验用的移液管、毛巾、镊子、剪刀等均需按要求灭菌，并进行灭菌效果验证。以保证实验的物料达到实验要求。

4.4 实验方法

此次能力验证实验方法严格按照《中国药典》2020版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查和ACAS-PT1396(2022)非无菌产品微生物限度检查：微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证参考指导书的实验步骤及要求进行实验。

4.5环境条件

因样品内可能含有致病菌，所以本次实验在生物安全柜中进行。实验前后对实验环境进行灭菌，以保证实验安全、减少环境污染。

4.6不足

据蔡爱君报道，在微生物检验中使用TTC法检出总菌落数显著优于其他方法[4]，而我们在实际检验过程中并没有使用到该方法。根据此次能力验证结果反馈情况，其中22-X687样品结果Z值相对其他三个样品结果的Z值大，今后可参考该方法改进能力验证实验方法，以进一步提高实验室检测结果的准确性。

5  总结

根据此次能力验证的结果反馈情况，充分说明了本实验室具备药品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数的检测能力。

能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力有重要意义。通过参加能力验证，总结实验室的优势及不足，充分发扬优势改正不足，以提高实验室的检测能力和管理水平，增强政府监管部门的公信力。

参考文献

[1]  石声鑫，陈 庆，李小兰. 食品检测机构能力验证过程中的质量控制[J] 现代食品,2022,28(17):81-83.

[2]  张煜琳,李哲 ,王建声 ,杜彦辉 . 药品中需氧菌总数计数能力验证结果分析[J]. 药品评价, 2022,19（3）:154-157.

［3］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 :2020 年版 四部 [S]. 北 京 : 中国医药科技出版社 ,2020:165．

[4]  汤曼莉 吴愫青 杨玉玲 李辉. 需氧菌总数能力验证的结果与分析[J]. 质量安全与检验检测, 2022年第 3期 Vol.32 No.3:125-127.

第一作者：杨丽雯（1989-），女，广西桂林人，本科，工程师，研究方向：食品药品检验

通讯作者：陈旭煜（1992-），女，广西钦州人，本科，工程师，研究方向：食品药品检验