FISH和IHC检测乳腺浸润性导管癌HER-2基因扩增及与C-erbB-2蛋白表达结果的一致性分析

于兵，房艳春，翟丽丽，陈文静，杨光，

摘要：目的 分析FISH（荧光原位杂交）和IHC（免疫组化）检测乳腺浸润性导管癌HER-2（人表皮生长因子受体2）基因扩增及与C-erbB-2蛋白表达结果的一致性。方法 选取2018年2月~2019年11月我院收治的104例乳腺浸润性导管癌患者，分别使用FISH和IHC检测，对比HER-2基因扩增和C-erbB-2C-erbB-2蛋白蛋白表达一致性。结果 HER-2基因扩增随着C-erbB-2蛋白表达提升而提升，两者之间有一致性。结论 IHC检测乳腺浸润性导管癌C-erbB-2蛋白表达可用于初步筛查，使用FISH检测HER-2基因扩增可有效判定疾病状况，且两者之间有极大一致性。

关键词：FISH；IHC检测；乳腺；浸润性导管癌；C-erbB-2蛋白

HER-2基因为原癌基因，其中20%浸润性乳腺癌组织能检测到HER-2基因以及C-erbB-2蛋白表达，且和疾病发展、转移密切相关。现阶段针对HER-2基因扩增的靶向药物已经被用于乳腺癌的临床治疗，其可有效延长患者生存时间，故检测HER-2基因可有效判定患者预后状况^[1]。IHC检测C-erbB-2蛋白表达的方法操作简单，费用低廉，且与FISH检测结果一致性高，已经成为一种重要的常规检测方式。本次研究深入分析两种不同检测手段对黑龙江省西部地区浸润性乳腺癌检测结果的异同，并对检测结果进行了对比分析。

1 资料和方法

1.1一般资料

选取2018年2月~2019年11月我院收治的乳腺浸润性导管癌患者104例，全部为通过手术切除获取的乳腺癌标本，患者术前并未接受其他治疗，且标本体均使用10%中性甲醛固定，至少固定6h，使用石蜡进行包埋，切片厚度3-4μm，通过HE染色证实患者为浸润性导管癌，其中IHC（免疫组化）方式进行C-erbB-2蛋白常规检测，FISH（荧光原位杂交）进行HER-2基因扩增诊断。

1.2 方法

所有试剂盒主要由福州迈新生物技术公司生产。 IHC法：免疫组化S-P法检测C-erbB-2蛋白表达，当检测结果呈现为棕褐色颗粒时则为阳性。使用高倍显微镜观察10个视野，0：无染色或=＜10%肿瘤细胞不完整的、微弱的细胞膜染色；（+）为＞10%肿瘤细胞不完整，较弱细胞膜着色；（++）＞10%肿瘤细胞较弱-中强度的完整细胞膜着色；（+++）＞10%肿瘤细胞呈现强、完整、均匀的细胞膜染色。

FISH法：其中HER-2基因扩增时将其标记为红色，17号染色体则为绿色。主要方式为：将组织标本浸入2%3-氨基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液内5min，使用蒸馏水漂洗，之后自然风干，使用甲醛固定，包埋于石蜡内，65℃烘烤。室温脱蜡10min内进行2次，100%乙醇浸泡，之后为85%和70%乙醇室温下复水2min。室温下去离子水浸泡3min，使用50℃亚硫酸钠处理25min，缓冲洗涤5min×2次。随机观察浸润区域30个肿瘤细胞，统计红信号和绿信号个数，计算红、绿信号比值即Ratio值，Ratio＜1.8提示无基因扩增；Ratio＞2.2提示有基因扩增。

1.3统计学方法

用SPSS23.0处理数据，以X²检验计数资料（％、n），以t检验计量资料(`x±s)，P＜0.05代表差异有统计学意义。

2 结果

为患者进行乳腺癌疾病诊断时：HER-2基因扩增随着C-erbB-2蛋白表达提升而提升，两者之间有一致性。

表1 乳腺癌C-erbB-2蛋白以及HER-2基因扩增（n,%）

C-erbB-2蛋白	例数	HER-2基因		HER-2基因
		扩增	未扩增	扩增比例（%）	未扩增比例（%）
（+++）	46	44	2	95.65	4.35
（++）	32	9	23	28.12	71.88
（+）	26	1	25	3.85	96.15
合计	104	54	50	51.92	48.08

3 讨论

乳腺癌为常见恶性肿瘤，病变的诊断、治疗为研究重点。多数研究发现，乳腺癌发生和HER-2基因表达之间有一定关系。HER-2可通过配体、受体蛋白结合进而形成同源二聚体，使得细胞酪氨酸残基出现磷酸化，进而极大激活细胞信号传导，因此可知基因在肿瘤发展中意义重大^[2]。C-erbB-2受到外部因素被激活之后有一定肿瘤转化活性，不仅可促使细胞癌变也可促进癌细胞生长。C-erbB-2过度表达则表示癌基因被极大激活，且癌变基因数量也可出现性质改变。

多数癌症细胞均发现HER-2基因扩增，C-erbB-2蛋白表达，对疾病治疗反应性差。其中在疾病治疗上针对伴有HER-2基因扩增的靶向药物临床效果显著，其通过补体和抗体细胞毒作用，杀伤蛋白过表达和基因扩增；同时也可通过降低HER-2受体于细胞表面密度，控制癌细胞提升、肿瘤成长^[3-4]。因此可知使用基因扩增以及蛋白表达诊断时可有效判定患者疾病严重情况并指导治疗。在本次研究对于蛋白检测主要采用IHC，因此检测时会破坏蛋白质，使得结果受到影响。FISH技术在诊断过程中主要优势为可对蛋白实施定量分析，有效减少人为失误，同时有重复性和可靠性高的特点。因此可知对于HER-2基因表达分析时可有效评估疾病，也可为疾病治疗提供指导^[5]。本次研究中发现C-erbB-2蛋白（+）、（++）、（+++）呈持续提升趋势且和HER-2基因扩增为正相关关系。现阶段多数分析认为，C-erbB-2蛋白、HER-2基因扩增可直接用于疾病诊断，其中对于IHC检测为阴性患者需进行FISH检测。

综上所述，为乳腺浸润性导管癌患者采用HER-2基因扩增、C-erbB-2蛋白表达诊断均可用于疾病诊断判定，且两者有极大一致性。

参考文献

[1]武莎斐, 刘媛媛, 刘笑玎,等. HER2免疫组织化学1+浸润性乳腺癌的基因扩增状态和mRNA表达分析[J]. 中华病理学杂志, 2018, 47(7):522-526.

[2]管枫, 阎红琳, 袁静萍. IHC与FISH检测乳腺癌HER2表达的差异性分析[J]. 中华内分泌外科杂志, 2018, 12(5):372-376.

[3]罗斯译,柴利,阮思蓓,等.川南地区乳腺癌患者人表皮生长因子受体2基因状态及其蛋白表达与临床病理特征的关系[J].实用医学杂志,2020,36(1):22-26.

[4]张欢,罗洞波,赵兵.免疫组织化学法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2状态一致性的对比研究[J].新疆医科大学学报,2018,41(2):199-202.

[5]詹晓芬, 王少洪, 况丽平,等. 标本离体固定时间对荧光原位杂交技术检测乳腺浸润性导管癌HER2基因的影响[J]. 广西医学, 2019,41(8):996-998.