家兔脑梗塞模型制作中股动脉穿刺系统改良的探讨

朱明新① 王连峰 ② 张中华③

摘要：目的：应用改良的穿刺系统穿刺家兔股动脉制作急性脑梗塞模型，旨在提高制作过程中股动脉穿刺的成功率。方法：选择成年健康的家兔40只,随机分为两组，A组（实验组）20只， B组（对照组）20只。A组应用改良后的24G静脉留置套管针，采用seldinger法穿刺股动脉，超选择性插管至右侧颈内动脉，经微导管缓慢注入预制自体血栓栓塞颈内动脉制成急性脑梗塞模型。B组切开暴露股动脉18G穿刺针穿刺，引入微导管插管至右侧颈内动脉，与A组同样的办法栓塞右侧颈内动脉。结果：A组1只股动脉穿刺失败，19只股动脉穿刺并右侧颈内动脉均栓塞成功，成功率为95%。B组14只股动脉穿刺失败，6只股动脉穿刺成功并顺利栓塞右侧颈内动脉，穿刺部位渗血均较严重，造模成功率为30%。两组造模成功率统计学差异有显著性。结论：改良穿刺系统穿刺家兔股动脉制作急性脑梗塞模型，具有操作简单、快捷、成功率高、出血少的特点，是一种符合实际应用的技术。

关键词：Seldinger法；股动脉；脑梗塞；动物模型

Abstract：Objective：Application of improved rabbit femoral artery puncture system puncture make acute cerebral infarction model, in order to improve the success rate of femoral artery puncture in produce process.Methods：40 healthy adult rabbits were randomly pided into two groups, group A (experimental group) 20 rabbits, group B (control group) 20 rabbits. In group A, using a modified 24G intravenous catheter tube to gain a femoral artery access in seldinger methods, super-selective catheterization was placed into the right carotid artery, the embolism that through micro catheter slowly injecting the pre-autologous thrombosis into the right carotid artery was used as the acute cerebral infarction models. In group B, Incision the exposed femoral artery, 18G needle puncture, the micro catheter into the right internal carotid artery, using the same way of group A to make the embolism of right internal carotid artery. Results：1 rabbit in group A femoral artery puncture failed, 19 rabbits femoral artery and right internal carotid artery embolism successfully, the success rate is 95%. 14 rabbits in group B femoral artery puncture failure, 6 rabbits femoral artery puncture successful and embolism of right internal carotid artery, puncture site bleed seriously; the success rate of the model is 30%. The modeling success rate of two groups was statistically significant difference. Conclusion：Improved rabbit femoral artery puncture system make acute cerebral infarction model, with simple, fast, high success rate, less bleeding characteristics and is a realistic technology application.

Keywords: Seldinger method； femoral artery；cerebral infarction；animal model

前言

建立一种合适的动物急性脑梗塞模型，对于急性脑梗塞的病理机制探索及新疗法疗效的评价具有重要价值^【1】。目前文献报道脑缺血模型广泛采用的是利用自体血栓^{【2、6、8、17】}，栓塞颈内动脉制作动物模型^【4、8】，主要用于研究梗塞后溶栓治疗的研究，动物模型各不一样，主要有大鼠、兔、狗制作大脑中动脉局灶性缺血（MCAO）模型，然而各种文献报道的制作方法不一^{【2、4、7-13】}，我们依据文献报道的方法制作动物模型，发现制模成功率低、失血量大，实验动物死亡率高，针对这些问题，我们总结文献结合自己经验，选择并改良股动脉穿刺插管材料，股动脉穿刺成功率大幅提高，为制作理想的动物模型打下基础。现对实验过程中穿刺系统改良及成功率的报道如下。

2 材料与方法

2.1 健康成年家兔40只，体重2.0一3.2kg，雌雄不限，实验动物均来自市场随机采购。

2.2 实验器材和药品 实验所需器材及药品 静脉切开手术器械，改良后的24G静脉留置套管针（附图1），1.7F/2.1F微导管及0.010微导丝，1ml、5ml及10ml注射器，腰穿针数根，兔固定支架（自制），75%乙醇，地西泮注射液，地塞米松注射液，碘海醇。数字减影血管造影（DSA）。

2.3 动物模型制作

2.3.1 栓塞剂的制备 于兔耳缘静脉抽取血液5ml，用腰穿针吸取少量血液并保留在腰穿针管腔中，常温下放置24小时，使用时用空针或针芯推出，剪成大小约0.5mm碎块备用。

2.3.2 术前准备与麻醉 术前动物禁食、禁饮6小时，将家兔仰卧位固定于自制固定架上，采用复合静脉麻醉，经耳缘静脉缓慢注射地西泮2.5mg/kg，后用32%,乙醇(4 ml/kg体重)在3 min内从兔耳缘静脉缓慢注射进行麻醉^【5】，并静脉静推1mg地塞米松。给药后观察角膜反射、肌肉松弛情况等麻醉程度指标,达到满意麻醉效果进行手术，术中根据动物苏醒情况追加乙醇，双侧腹股沟区备皮、消毒，铺巾后备用。

2.3.3 24G静脉留置套管针的改造，退出针芯，用钳子取出留置针后端的橡皮塞（见附图），消毒后备用。

2.3.4 模型制作方法 A组股动脉穿刺及模型制作方法 家兔双侧腹股沟常规备皮、消毒，确定股动脉搏动最明显处，应用改良后的24G静脉留置套管针，采用seldinger法穿刺股动脉，穿刺成功后套管在针芯的支撑下，送入血管腔内，退出针芯，引入微导丝，必要时可利用5ml注射器针头作为微导丝导向，然后退出留置针套管，并引入微导管，超选择插管行全脑血管造影，了解双侧颈部及头部动脉走行及分支情况，排除血管异常情况，超选于右侧颈内动脉，经微导管缓慢注入预制自体血栓，栓塞右侧颈内动脉，并DSA造影确认。B组切开腹股沟区皮肤（对侧备用），暴露股动脉，直视下采用18G穿刺针直接穿刺股动脉，置入3F血管鞘^【1-4】，在微导丝引导下插入微导管，采用A组同样的办法栓塞右侧颈内动脉。

2.4 统计学方法

应用SPSS11.0软件系统，率的检验采用四格表的Fisher确切概率法检验，设定P﹤0.05为有统计学意义。

3 结果

股动脉穿刺及栓塞结果 A组1只股动脉穿刺失败，19只股动脉穿刺成功，并顺利栓塞右侧颈内动脉，模型制作成功率为95%，且失血量较少少于5ml。B组14只股动脉穿刺失败，6只股动脉穿刺成功，造模成功率为30%，失血量约10-15ml。两组股动脉穿刺成功率比较统计学差异有显著性（P﹤0.01）。

4 讨论

急性脑梗塞动物模型的制作必须具备操作简单、快捷、成功率高、费用低廉的特点，其中股动脉穿刺是一大难点。目前诸多家兔实验均使用18G穿刺针经股动脉穿刺，置入3F或4F血管鞘^【15】。本实验对兔股动脉穿刺系统的改良进行探讨及尝试，并建立急性脑梗塞动物模型，A组采用改良后的穿刺系统seldinger法穿刺，19只穿刺成功，其中1只股动脉多次穿刺均未能成功；B组采用切开皮肤、皮下组织显露股动脉，直视下穿刺，但发觉此穿刺法应用很困难，仅有6只穿刺成功并插管行右侧颈内动脉栓塞。家兔本身血管纤细，B组实验兔中采用18G穿刺针较粗大，反复发生血管穿破、难以止血、血肿形成的情况，穿刺成功的股动脉勉强置入3F血管鞘，再经血管鞘引入导管栓塞右侧颈内动脉，成功的6只实验兔，可能是体重较大，均在3kg以上的原因。文献报道18G穿刺针直视下经股动脉穿刺，置入3F血管鞘，但其选择实验兔体重在4至5.5k g^【6】，比笔者选用的动物体重基本增加1倍左右，因市场难以购买到4至5.5kg体重家兔，重复其实验过程非常困难。与B组穿刺法相比较后，考虑到所选用家兔中体重较小，血管纤细，遂在A组动物中放弃置入血管鞘，采用改良后的24G静脉留置针行seldinger法穿刺股动脉，直接引入微导丝及微导管行右侧颈内动脉栓塞，13只一次性穿刺成功，4只同侧股动脉穿刺2次成功，2只多次穿刺右侧失败，但改穿左侧时成功，1只穿刺双侧股动脉均失败。预实验当中曾因穿刺方法的欠妥、失血、麻醉、血管刺激等因素导致多次失败，但在反复尝试，改良穿刺器材后，股动脉穿刺成功率逐步提高。所有穿刺插管成功的家兔均采用预制自体血栓栓塞成功，DSA造影证实。

介入手术行股动脉穿刺, 韦日明、冯飞玲等报道^【14】穿刺点基本选择在腹股沟韧带下方2cm以内,股动脉搏动明显的地方，在实际操作中常出现穿刺点周围血肿或皮下出血，分析其可能原因有：术者操作技术不熟练，穿透动脉壁；反复多次穿刺；穿刺点血管壁的损伤；术后压迫不当。本次实验穿刺点渗血A组较轻，全过程中股动脉穿刺点渗血为较少，纱布加压2分钟即可止血，股动脉周围无血肿形成。在B组实验中，穿刺点出血较严重，多在10-15ml左右。比较两组实验动物，最大的差别是穿刺针不一样，A组穿刺针细，穿刺过程中重复操作次数少，穿刺失败后止血容易，然而B组穿刺针粗，本来实验兔股动脉纤细，难以一次性成功，需要反复穿刺，这样对股动脉损伤大，止血不易。在预实验中行股动脉穿刺，常由于失血过多，导致实验动物死亡，可能原因是实验兔体重较小、血管纤细，另外穿刺针的选择也是一个重要因素，经过反复试验后，选用24G静脉留置针改良后穿刺股动脉，出血明显减少。

5 结论

改良穿刺系统穿刺兔股动脉制作急性脑梗塞模型，具有操作简单、快捷、成功率高、出血少的特点，是一种符合实际应用的方法。

参考文献：

[1] 张文雷等.兔肾动脉栓塞实验技术的研究[J]. 中国老年学杂志,2009，29(18):20～21.

[2] 何玉洁，吴清华等. 一种介入技术制作的局灶性脑栓塞溶栓实验模型[J].临床放射学杂志,2006,25(9):873～877.

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附图（Figure）

24G静脉留置针改良

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