人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测宫颈高级别病变的临床价值

张玲袁良东王全义

Theglobalincidenceofcervicalcancerisrankedsecondinthewomen'scancer,theincidenceofHPV(humanpapillomavirus,HPV)infectionandcervicalcancerarecloselyrelated[1].HPVtestinghasbeenscreenedforcervicaldisease,cervicalcancerpreventionimportantprojects.HPVdetectionmethodscurrentlymostcommonlyusedlaboratoryfortestingforhigh-riskHPVtypeDNA.CervicalHPVinfectionisanecessarycondition,butnotsufficientcondition.WithoutE6/E7mRNAtranscriptionandexpression,evenwithhigh-riskHPV,cervicalcancerisstillthere[2].TheHPV-E6/E7mRNAdetectioncanreflecttheactivityofHPVoncogenesE6/E7canbemoreintuitiveassessmentoftheriskofcervicalcancerandprognosis[3].Inthispaper,thebranchedDNAtechnologyforHPV-E6/E7mRNAdetection,acomparativeanalysisfordetectingcervicallesionsinthehigh-levelclinicalvalue.

宫颈癌是全球发病率居第二位的妇女恶性肿瘤，人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）的感染与宫颈癌的发病有密切的关系［1］。HPV的检测已成为筛查宫颈疾病，预防宫颈癌发生的重要项目。目前实验室常用的HPV检测方法大多是针对高危HPV型的DNA进行检测。HPV感染是宫颈癌的必要条件，但非充分条件。如果没有E6/E7mRNA的转录和表达,即使有高危HPV，仍不会有宫颈癌［2］。而HPV-E6/E7mRNA检测能较好地反映HPV致癌基因E6/E7的活动度，可以更为直观地评估宫颈癌的发病风险和预后［3］。本文采用支链DNA技术对HPV-E6/E7mRNA进行检测，比较分析其检测宫颈高级别病变的临床价值。

资料与方法

1．一般资料

以2013年9月至2016年3月在本院因宫颈炎、阴道异常出血、阴道分泌物增多而就诊及常规妇科体检的妇女为研究对象（均已有性生活），年龄21～65岁。

2．仪器与试剂科蒂亚生物有限公司电热恒温鼓风干燥箱、冷光仪、宫颈高危HPV-E6/E7mRNA检测试剂盒。

3．方法

3.1标本的采集与保存方法

（1）细胞标本：用细胞采样器的中央刷毛部分轻轻的深插入子宫颈管内，按同一个时针方向转动采样器5～8周后，将收集的细胞放入细胞保存液中。（2）宫颈组织：用蜡块包埋的组织，切片，脱蜡至水，用刀片刮下。

3.2标本处理

（1）细胞标本：将标本移入离心管，3000ｒ/min离心5min后倒掉上清液，用2ml去离子水洗后再次离心，去上清液，达到标本同质化的目的,将离心后沉淀细胞团。（2）石蜡块包埋的组织，切片，脱蜡至水，用刀片刮下，置入离心管。

3.3转入物的释放

（1）将已处理的有细胞的离心管中加入裂解混合液，用移液枪吹打细胞团，使细胞分散悬浮，再加入5μＬ蛋白酶K。放入65℃恒温箱中放置１h后取出，取上清液用于检测。（2）将已处理的有组织的离心管中加入裂解混合液300μＬ。用移液枪吹打细胞团，使细胞分散悬浮。再加入2μＬ蛋白酶K。放入65℃恒温箱中放置0.5h后取出，取上清液用于检测。按照说明书配置缓冲液。

3.4使用高危HPV-E6/E7mRNA检测试剂盒进行检测操作严格按说明书进行。

4．统计学处理用SPSS13.0统计软件进行数据处理，计数资料以率表示，组间比较采用χ２检验，P＜0.05为差异有统计学意义.

结果

905例ASC-US患者行HR-HPV检测，阳性者368例，占40.66%，30岁以下女性高危型HPV感染率最高，30岁以上患者随着年龄的增加感染率下降(见表1)。对144例HR-HPV阳性的ASC-US患者行阴道镜下活检并HPVE6/E7mRNA检测，其结果为炎症28例(占10.71%)，尖锐湿疣4例（占75.00%），低度病变106例(占53.77%)，高度病变5例(占83.33%)，宫颈癌2例(占100.00%)，未见SCC及其它恶性病变(表2)。

不同年龄组ASUCS与HR-HPV及HPV-E6/E7mRNA检验结果比较（表一）

讨论

高危型HPV感染的妇女中有相当一部分可发展成子宫颈癌前病变对HPV感染进行准确的检测可提高宫颈癌前病变筛查的敏感性。目前HPV的检测方法主要有测定DNA和E6/E7mRNA，目前欧美国家用于筛查检测HPV-DNA的方法主要是第二代杂交捕获技术（hybridcapture2，HC2）。这种方法主要针对高危亚型HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68的HPV-DNA进行检测。HPVE6/E7致癌蛋白是细胞恶性转化的主要原因。mRNA是病毒癌基因转录产物，它们的表达会导致宿主细胞向恶性方向转化如癌基因没有表达则细胞本身不会发生癌变。HPVE6/E7mRNA在宫颈组织中表现癌基因活性。同时E6/E7可显著抑制p53和Rb这两种肿瘤抑制蛋白，从而干扰细胞周期调节促进细胞无规则生长［4］。研究已证实，测定E6/E7有助于区分一过性感染（低表达）和发展为癌（持续感染高表达）的人群，可作为妇女筛查的重要靶点［5］。许多学者报道HPV-E6/E7mRNA水平与病变的严重程度相关，在高级别宫颈病变检测有更好的特异性［6－7］。因此对宫颈细胞中HPVE6/E7mRNA的检测有利于对感染高危HPV病毒的妇女进行风险评估。

本文对ASCUS、LSIL、HSIL和ASC-H分析显示：随着病理级别的升高，HPV-E6/E7mRNA阳性率（χ2=20.139，P＜0．001）呈现上升趋势与Ratnam［8］报道的结果一致，提示HPV-E6/E7mRNA在宫颈疾病发病和病理级别升高中起重要作用。提示该技术可筛检出真正具有致癌风险者，提高筛查效率，降低漏检，同时减少过度诊断治疗。

参考文献

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