全自动振荡离心细胞块制作机在腹水中的应用

徐华苏旭尹万

[摘要]目的探讨全自动振荡离心细胞块制作机在腹水细胞块制作中的应用，了解应用全自动振荡离心细胞块制作机在腹水细胞块制作中的优点：腹水细胞块制作方法的标准化、自动化、减少人为的误差。方法比较30例患者腹水应用全自动振荡离心细胞块制作机制作腹水细胞块和不应用全自动振荡离心细胞块制作机，而应用传统的离心沉淀法制作腹水细胞块。应用全自动振荡离心细胞块制作机制作腹水细胞块比应用传统的离心沉淀法制腹水细胞块具有更好的细胞分布均匀性，癌细胞检出率，切片上肿瘤细胞更多，分布更均匀，并且不受操作人员的人为因素影响。结论全自动振荡离心细胞块制作机的应用有助于腹水细胞块制用方法的标准化，自动化，减少人为的误差，提高肿瘤细胞的检出率和保证肿瘤细胞在细胞块中分布的均匀性更好，有利于细胞学病理诊断和分子病理诊断的应用。

腹水制作细胞块石蜡切片的方法主要利用离心沉淀的方法，但传统的离心沉淀方法制作细胞块石蜡切片，制作困难，制作效果差，不能保证每次制作都能成功，细胞在细胞块内分布不均匀，受操作人员干扰因素较多。现在使用全自动振荡离心细胞块制作机这种专用设备解决了腹水制作细胞块的标准化，自动化，细胞块内细胞分布均匀性好，对最终的细胞学病理诊断有提供了一个强有力的有效工具。

[关键词]细胞块全自动振荡离心细胞块制作机细胞学病理诊断

DOI:10.3760/cma.j.issn.1672-7088.2013.30.1545

作者单位：611130四川成都，成都市第五人民医院病理科

[作者简介]徐华（1969-），男，四川省眉山人，成都市第五人民医院病理科副主任医师，研究方向：肿瘤发病机理，细胞和组织病理，病理技术开发。

基金项目：本文系四川省卫生厅（120526）。

TheApplicationofAutomaticOscillationCentrifugalCellBlockMakingMachineinAscites

XuHua,SuXu,YinWan

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheapplicationofautomaticoscillationcentrifugalcellcellblockmakingmachineinascitescellblockproductionanditsadvantages.MethodsPartof30caseswithascitesreceiveautomaticoscillationcentrifugalcellblockmakingmachinetoproduceascitescellblock,whileothersusetraditionalcentrifugalprecipitationtoproduceascitescellblock.ResultsTheascitescellblocksproducedbytheautomaticmachineisbetterdistributedanduniformedthanusingtheconventionalmachine.Ithasbetterdetectionrateofcancercells.andcreatsmoretumorcells,thedistributionofwhichismoreuniformed.Moreover,itisnotaffectedbytheoperator.ConclusionTheapplicationofautomaticoscillationcentrifugalcellmakingmachinehelpsascitescellblockpreparationmethodmorestandardizedandautomatic.Itcanalsoreduceartificialerror,enhancestumorcelldetectionrateandguaranteeabetterdistributionoftumorcellsinthecellblock,whichisconducivetotheapplicationofcytologicaldiagnosisandmolecularpathologicaldiagnosis.

Keywords:cellblock;automaticoscillationcentrifugalcellblockmakingmachine;cytologydiagnosis

1.材料和方法

收集本院2013年1月至2013年4月30个病例腹水，女性17名，男性13名，平均年龄50岁。每个病例同时使用全自动振荡离心细胞块制作机制作细胞块石蜡切片和传统离心沉淀法制作细胞块石蜡切片，进行比较。传统离心沉淀法制作细胞块石蜡切片方法：取腹水15ML使用台式802低速离心机离心5分钟，转速3000转每分钟，倒掉上清液，再倒入腹水15ML使用台式802低速离心机离心5分钟，转速3000转每分钟，倒掉上清液，反复进行3-5次，直到离心管底部见到较多沉淀物为止，再倒入10%中性福尔马林固定2小时后，取出沉淀物，用纱布包裹，进入脱水机进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色等完成HE制片，具体操作步骤：4％中性甲醛固定液2×60min，95%乙醇Ⅰ2×60min，95%乙醇Ⅱ2×60min，无水乙醇Ⅰ60min，无水乙醇Ⅱ60min，二甲苯Ⅰ30min，二甲苯Ⅱ30min，石蜡Ⅰ30min（在60摄氏度环境温度下），石蜡Ⅱ60min（在60摄氏度环境温度下），石蜡Ⅲ90min（在60摄氏度环境温度下），石蜡包埋（在60摄氏度环境温度下），石蜡切片，捞片，烤片（在60摄氏度环境温度下）50分钟，二甲苯Ⅰ：5～10min，二甲苯Ⅱ：5～10min，无水乙醇Ⅰ：1～3min，无水乙醇Ⅱ：1～3min，95%乙醇Ⅰ：1～3min，95%乙醇Ⅱ：1～3min，80%乙醇：1min，蒸馏水：1min，苏木精液染色：5～10min，流水去苏木精液：1min，1%盐酸-酒精：1～3s，稍水洗：1～2s，返蓝（用温水1%氨水）：5～10s，流水冲洗：1～2min，蒸馏水洗：1～2min，0.5%伊红液染色：1～3min，蒸馏水洗：1～2s，80%乙醇：1～2s，95%乙醇Ⅰ：2～3min，95%乙醇Ⅱ：2～3min，无水乙醇Ⅰ：3～5min，无水乙醇Ⅱ：3～5min，石炭酸-二甲苯：3～5min，二甲苯Ⅰ：3～5min，二甲苯Ⅱ：3～5min，二甲苯Ⅲ：3～5min，中性树胶封片。[1]

应用全自动振离荡心细胞块制作机制作腹水细胞块石蜡切片的方法：取100ML腹水放入离心管，放入全自动振荡离心细胞块制作机内离心，离心转速为3000转每分钟，离心时间5分钟后振荡5分钟，再离心5分钟转速3000转每分钟，倒掉上清液，再向离心管倒入腹水100ML，，放入全自动振荡离心细胞块制作机内离心，离心转速为3000转每分钟，离心时间5分钟后振荡5分钟，离心5分钟转速3000转每分钟，倒掉上清液，反复进行3-5次，直到离心管底部见到较多沉淀物为止，再倒入10%中性福尔马林固定2小时后，取出沉淀物，用纱布包裹，进入脱水机。具体操作步骤：4％中性甲醛固定液2×60min，95%乙醇Ⅰ2×60min，95%乙醇Ⅱ2×60min，无水乙醇Ⅰ60min，无水乙醇Ⅱ60min，二甲苯Ⅰ30min，二甲苯Ⅱ30min，石蜡Ⅰ30min（在60摄氏度环境温度下），石蜡Ⅱ60min（在60摄氏度环境温度下），石蜡Ⅲ90min（在60摄氏度环境温度下），石蜡包埋（在60摄氏度环境温度下），石蜡切片，捞片，烤片（在60摄氏度环境温度下）50分钟，二甲苯Ⅰ：5～10min，二甲苯Ⅱ：5～10min，无水乙醇Ⅰ：1～3min，无水乙醇Ⅱ：1～3min，95%乙醇Ⅰ：1～3min，95%乙醇Ⅱ：1～3min，80%乙醇：1min，蒸馏水：1min，苏木精液染色：5～10min，流水去苏木精液：1min，1%盐酸-酒精：1～3s，稍水洗：1～2s，返蓝（用温水1%氨水）：5～10s，流水冲洗：1～2min，蒸馏水洗：1～2min，0.5%伊红液染色：1～3min，蒸馏水洗：1～2s，80%乙醇：1～2s，95%乙醇Ⅰ：2～3min，95%乙醇Ⅱ：2～3min，无水乙醇Ⅰ：3～5min，无水乙醇Ⅱ：3～5min，石炭酸-二甲苯：3～5min，二甲苯Ⅰ：3～5min，二甲苯Ⅱ：3～5min，二甲苯Ⅲ：3～5min，中性树胶封片。[1]

2.结果30例患者腹水用传统离心沉淀方法制作的细胞块HE切片，其中一例由于腹水内细胞和蛋白含量少，制作细胞块时离心管底部沉淀物少未能成功制作腹水细胞块，其余29例患者腹水细胞块HE切片上的的间皮细胞分布不均匀，有些地方间皮细胞分布多，有些地方间皮细胞分布少，是由于腹水离心时同类细胞在离心时主要分布于同一层面，而包埋时很难混匀，让细胞分布均匀困难。同样30例患者腹水用全自动振荡离心细胞块制作机制作腹水细胞块石蜡HE切片全部成功，切片上间皮细胞分布均匀，没有发现切片上间皮细胞分布不均匀的情况。是由于全自动振荡离心细胞块制作机制作腹水细胞块过程中，进行了振荡混匀，因此最后完成的腹水细胞块内间皮细胞及其他各类细胞分布均匀。

3.讨论腹水内寻找癌细胞早期的方法是用离心管离心沉淀，倒掉上清液，取离心管底部沉淀物涂片，此种方法简便，但易爱操作人员人为因素的影响，导致涂片上细胞分布很不稳定，影响最终病理诊断结果。并且同一操作人员反复制作同一份腹水离心沉淀涂片，每次涂片的结果有差异，无法进行分子病理学的诊断。后来使用琼脂包埋进行腹水离心沉淀细胞块制作，但是由于琼脂配制困难，必须使用时才能配制，如果提前配制琼脂容易坏掉不能使用。并且琼脂与腹水和其内的细胞相容性困难，制作成功率低，细胞块内细胞分布不均，进行分子病理诊断不理想。再后来使用腹水直接离心沉淀，取沉淀物进行细胞块石蜡切片制作，此种方法省略了琼脂做载体，效果有提高，但仍然存在细胞块内细胞分布不均，进行分子病理诊断有影响，并且由于操作人员不同或者是同一操作人员进行不同次的操作制作的细胞块均有所不同，无法进行标准化制作，无法进行自动化制作，最终对病理诊断结果有无法弥补的影响，因为每次制作的细胞块石蜡切片都有明显的不同。

现在使用全自动振荡离心细胞块制作机专用设备可进行标准化和自动化的腹水细胞块制作，细胞块内及HE切片上细胞分布均匀，并不会因为不同操作人员或同一操作人员不同次的操作导致制作的腹水细胞块石蜡HE切片上的细胞分布的显著差异。因此使用全自动振荡离心细胞块制作机专用设备可进行标准化和自动化的腹水细胞块制作在现阶段具有明的优势，为腹水细胞学病理诊断的标准化提供了可靠的工具。

参考文献：

[1]王伯沄,李玉松等.病理学技术[J].人卫出版社,2006,6:80.