提高甲状腺冷冻切片制作质量的体会

黄燕

【摘要】甲状腺疾病是内分泌系统常见疾病，影响着人们的健康和生活质量，为提高临床病理诊断的准确性，本文对提高甲状腺冷冻切片制作质量做一介绍。

【关键词】甲状腺冷冻切片

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）35-0347-01

冷冻切片是一种在低温条件下，使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法[1]。甲状腺疾病是内分泌系统的常见病和多发病，且其结构特殊，在冷冻切片的过程中易产生影响病理诊断的假象。本研究就如何提高甲状腺冷冻切片制作质量的体会介绍如下。

1.材料与方法

1.1材料选取本院2014年1月至2014年12月手术送检的甲状腺标本756例。

1.2设备英国产ThermoFSE型冷冻切片机，ThermoMX35一次性刀片，OCT包埋剂。

1.3试剂甲醇固定液、Gill改良苏木素染色液、醇溶性伊红、梯度酒精和二甲苯等。

1.4方法①根据所取组织的大小在组织托上滴上适量的OCT包埋剂；②将组织块平放于包埋剂上并用冷冻锤轻压组织10S，使组织迅速达到较低温度以防冰晶的形成，切片机冻头温度控制在-14℃～-16℃为宜；③切片时用力均匀，厚度6μm左右，用常温载玻片粘贴后放入甲醇中固定1min左右；④放入Gill改良苏木素染色1min，水洗后直接用温水（45℃左右）返蓝，伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。整个过程时间在5～7min完成。

2.结果

甲状腺冷冻切片质量较好，切片完整无皱褶，组织结构清晰，染色鲜艳，核浆对比度好，合乎医生诊断需要。（附图甲状腺组织冷冻切片图1：10×10组织结构清晰，颜色鲜艳，透明度较好；图2：10×40细胞核结构清楚，核浆着色分明。）极少出现影响诊断的因素，准确率达99%以上。

3.讨论

甲状腺组织在冷冻切片中占有很大的比例，而甲状腺内含有结缔组织和滤泡，滤泡内充满胶质，空洞感较强，易发脆、收缩，组织经常出现破碎，或者出现粉末状，或者是组织切片有很多小裂口，产生冰晶，影响切片质量。产生冰晶的主要原因是没有迅速冷冻组织到合适温度，其形成机制主要有二[2]：一是蛋白质和水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来形成冰晶；二是人体细胞大约含有30%～40%水分，水在4℃时体积最小，冷却至零度以下时，水结成冰，体积增大。细胞间相互挤压，导致细胞形态发生改变，当冰晶融化后可在镜下看到大小不一形态不定的空隙。甲状腺组织温度在-14℃～-16℃间能切出较好的冷冻切片，甲状腺组织的适宜温度并等同甲状腺的冷冻温度，通常我们在更低的温度下迅速冷冻，以缩短冷冻的时间，等切片时回升到适宜温度。冷冻时间越短，产生冰晶就越少或无冰晶产生。对于冷冻过度的组织，我们可以用手暖一下或取出在室温停留片刻，目的是让组织快速回暖温，再行切片；对于甲状腺微小癌组织，粗修时千万要小心，仔细观察甲状腺组织切面，看到有微小的灰白区时要注意，避免本是微小癌的灰白点因粗修过度而切掉病变组织造成漏诊，对其性质的判断和手术方式的合理选择产生很大影响。切片时，将防卷板调整至合适位置，使冷冻切片能平整地切下来。贴片时，右手持载玻片向前，以一定的角度粘住切片的一端，轻轻往前拉伸，因玻片与切片之间有很大的温差，切片能很好地粘附在载玻片上。而且用这个方法贴片，切片更平整。固定是冷冻切片制作过程中十分重要的步骤之一。切片后要立即固定，切片晾干后再固定容易造成细胞退变。固定时间要充分，常用的固定液有甲醇、AAF液、95%乙醇、丙酮等。单纯固定液中甲醇的固定效果最为理想[3]，本实验采用甲醇作固定液，组织结构清晰；染色时苏木素时间比其他组织可以适当长些，使细胞核更为突出，苏木素水洗后直接用温水（45℃左右）返蓝，颜色鲜艳，核浆对比度好。有些单位苏木素水洗后用弱碱溶液蓝化，此时水洗应彻底，要避免残留的碱性促蓝液带入酸性的伊红液中，导致伊红染色不够亮丽，从而影响切片质量和美观。

染色之后，我们应养成镜下看片的良好习惯，使自己做的每一张切片做到心中有数，能够找出切片的优缺点，分析产生问题的原因，能不断从中积累经验，不断完善，不断提高。

其实想要切出好的冰冻切片，还要注意平时维护好冰冻机，正所谓“公欲善其事，必先利其器”。我们要定期对冰冻机进行清理和必要的检查，最好每周2-3次，清理机器内部即可以减少切片时的交叉感染又可以同时对切片机的性能进行检查，必要时还要除霜，保证机器的正常运转。

冰冻切片的质量，不仅靠技术员的经验，还要有严谨的工作作风。有条不紊，心态平和，不骄不躁的按照制作流程操作。只有掌握好每个细节，尽心尽力，才能更好的提高切片质量，做出理想的切片，为病理医师的准确诊断提供有力保障。

参考文献

[1]刘成龙，余琦，周会芹，等.7种固定液对冷冻组织切片固定效果的比较[J].诊断病理学杂志，2010，17(2):138.

[2]胥维勇，杨群.影响冷冻切片质量因素的分析[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2003，12(2)：228-229.

[3]豆文宪，朱小兰，骆新兰，等.甲醇在冷冻切片快速染色中的应用[J].诊断病理学杂志，2013，20(12):792-793.