非放射性标记免疫法测定性激素水平

孙丽

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)14-0147-02

【关键词】性激素免疫

性激素测定法，国内外一般均采用放射免疫测定法(RIA)，而用非放射性标记免疫法如磁分离酶联免疫测定法，目前国内已有应用。磁分离酶联免疫技术是80年代中期瑞士Serono诊断中心发明的一种非同位素免疫检测先进技术，称为磁性抗体免疫技术(MAIA)。该技术在游离型标记抗体和标记抗原．抗体复合物分离中具有完全和快速的优点。我们采用BiochemImmunosystems公司的产品，P(孕酮)、T(睾酮)和PRL(催乳素)试剂盒，用SEROZYME-Ⅱ酶联免疫测定仪，测定了50例标本性激素P、T、PRL的值，同时用放射免疫法(RIA)测定，结果经统计学处理，对磁分离酶联免疫测定，即MAIA法进行探讨。

1材料和方法

(1)仪器：SEROZYME-Ⅱ酶联免疫测定仪、磁分离器、混匀器，P、T、PRL配套试剂，由BiochemImmunosystems公司生产，北京倍爱康生物技术有限公司提供。

(2)P、T、PRL放免试剂盒由九鼎医学生物工程公司提供，GC-911伽玛计数器由中国科技大学科技实业部提供。

(3)标本收集，按实验要求留取。

(4)操作方法，严格按说明书进行。

2结果

(1)线性范围：各标准浓度相对应的吸光度值在仪器经对数处理后，线性良好，孕酮P在0～40μg／L，睾酮T在0～17μg/L，催乳素PRL在0～200μg/L的范围内与吸光度成线性关系。

(2)添加回收试验：向一已知浓度的标本(P、T、PRL)中分别加入高、中、低量的标准品(P、T、PRL)，测定其回收率(x±SD)为97.3％±2.1％，96.7％±1.89％，103.7％士1.57％。

(3)精密度试验：同时采用3份标本进行批内和批间测定。

(4)显色稳定性：空白对照(基质液+终止液)和测定管(酶标抗体复合物+基质液+终止液)在不同时间(即时、5分、10分、20分、40分、60分、120分钟)，观察其吸光度变化，波长为550nm。

(5)相关性比较。50例样品同时用MAIA和RIA测定P、T、PRL的值，将结果进行相关性比较，相关性均良好。

3讨论

磁分离酶联免疫测定法是BiochemImmunosystems公司的独家专利。该法将磁性颗粒分离技术引入酶联免疫测定领域，将两株单克隆抗体分别标记酶和异硫氰酸荧光素(FITC)，将抗FITC多克隆抗体经化学法与可磁化颗粒偶联，制成可磁化分离剂。测定时，将样品和两种标记抗体同时加至反应管中温育，然后加可磁化生成夹心固相免疫复合物。将试管置于磁板上，倾出反应液，再用清洗液洗涤，最后加底物显色，测OD值。应用磁性分离使免疫磁性微粒中抗体与待测样本中相应的抗原结合，待测部分与其它物质充分分离，无需再离心。又由于抗原抗体反应在均匀液相中进行，不仅反应速度快，而且均匀充分，时间明显短于固相分离。

用磁分离酶联免疫法测定P、T和PRL，对该方法在线性范围、准确度、精确度，显色稳定性、相关性进行评价。结果显示，线性范围较好，酶促显色结果稳定，回收试验P、T、PRL分别为97.3％±2.10％，96.7％±2.5％，103．7％±1．8％(x±SD)。批内CV<4％，批间CV<11％。用MAIA法和RIA法测定50份样本，结果作相关性比较，P、T、PRL的相关系数r为0.834，0.850，0.983，P<0.001，相关性均良好，表明该方法有较高的精密度和精确度，能满足临床测定的要求。

用MAIA测定性激素P、T、PRL操作简单，速度快、孵育、分离，显色和测定连续进行，曲线绘制及结果自动计算和打印，检测速度每秒一管，各项检测过程大致为1～2小时，样本随到随做，随时出结果，能满足医生和患者及时出报告的要求。SEROZYME-Ⅱ型测定仪三波长(492nm／550nm／630nm)，同时测定样本吸光度，用峰值和非峰值组合测定，可消除试管因素带来的误差，扩大仪器量程5倍，达10个吸光度单位，拓宽了检测范围，该种新的非放射性标记的超微量免疫化学分析方法，其各项性能指标可与同位素标记的RIA相媲美，无放射公害，同时操作和测定占用空间小，试剂的有效期长，不必每次作标准曲线，标本用量少，能替代放免法开展激素和肿瘤标志物的测定。据专家论证，至本世纪末，非放射性标记免疫分析技术将有新的发展，很可能部分取代放射免疫分析技术。因此，磁分离酶联免疫技术MAIA有广阔的发展前景，在激素和肿瘤标志物测定中有应用推广价值。

参考文献

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