HPLC法测定小儿腹泻颗粒中没食子酸的含量

雷林洁1缪娟1霍潘峰2田曜源1马亮英1（通讯

(1.新疆医科大学第二附属医院830028;2.新疆医科大学药学院830011)

【摘要】目的建立小儿腹泻颗粒中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，InertSustainC18柱(250×4.6mm,5μm)，检测波长271nm，流速:1.0mL?min-1，柱温40℃，流动相：甲醇-0.085%磷酸溶液(6:94)。结果没食子酸在1.24～62μg?mL-1范围内呈良好的线性关系，r=1，平均回收率为100.17%，RSD=0.61%。小儿腹泻颗粒中没食子酸的含量为1.03mg?g-1，RSD=1.12%。结论该方法操作简单、准确，可用于小儿腹泻颗粒中没食子酸的含量测定及质量控制。

【关键词】HPLC小儿腹泻颗粒没食子酸含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）35-0040-02

小儿腹泻散为我院的医院制剂（制剂批准文号：新药制字Z20040551），在临床使用有多年历史，疗效颇佳。全方由儿茶、五倍子、清半夏、朱砂、枯矾、氢氯噻嗪等药组成，以传统中医理论为指导，具有涩肠止泻之功效，主要用于小儿“水样便”腹泻。但是该方在患儿服用过程中常常使患儿出现“糊嘴”现象，并且该方性味苦涩、微有麻舌感，患儿服用时比较困难。因此，为提高该制剂在临床应用中生物利用度与患儿的用药顺应性，课题组参考《中药配方颗粒管理暂行规定》对小儿腹泻散进行剂型改造，制成等量、等效的小儿腹泻颗粒，并对其质量标准进行初步研究。本文参照中国药典[1]，采用高效液相色谱法测定小儿腹泻颗粒中没食子酸的含量，为更好地控制颗粒剂的质量提供实验依据。

1仪器与试药

高效液相色谱仪（LC-20AT型，SPD-M20型检测器、CTO-20ASVP型柱温箱、SIL-20A自动进样器，日本岛津）；电子天平（BS210S，北京赛多利斯天平有限公司，d=0.1mg）；电热鼓风干燥箱（DHG-9070A型，上海一恒科技有限公司）；超声波清洗器（KQ500DE型，昆山市超声仪器有限公司）；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，110831-201204）；磷酸（天津市化学试剂三厂，20120410）；甲醇（sigma，色谱纯），水为重蒸水；微孔滤头（0.45μm，天津富集科技有限公司），其余试剂均为分析纯。

小儿腹泻颗粒（实验室自制，20141224、20141226、20141228）

2方法与结果

2.1小儿腹泻颗粒制备

照小儿腹泻散处方量制备混合药粉（儿茶、朱砂、枯矾、氢氯噻嗪细粉，五倍子提取物，清半夏提取物）1份加入蔗糖细粉4粉，混匀，采用湿法制粒，加入适量70%乙醇制软材，60℃鼓风干燥，整粒，即得。

2.2没食子酸含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：InertSustainC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.085%磷酸溶液(6:94)；流速：1.0mL?min-1；进样量：10μL；柱温：40℃，由对照品色谱(液相检测器为二极管阵列)确定检测波长为271nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000。

AB

图1HPLC色谱图(A没食子酸对照品B供试品)

Fig1.HPLCchromatograms(A.gallicacid;B.sample)

2.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥的没食子酸对照品6.2mg，置100mL棕色量瓶中，采用50％甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（62μg?mL-1没食子酸对照品储备液）。

2.2.3供试品溶液制备[2]精密称取小儿腹泻颗粒0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25mL，称定重量，超声处理5min，冷却，再次称量重量，采用50%甲醇补足重量，摇匀，滤过，量取续滤液，即得。

2.2.4线性关系考察精密量取没食子酸对照品溶液（没食子酸浓度为62μg?mL-1）0.2、0.5、1、3、5、10mL分别置10mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以没食子酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。没食子酸的线性回归方程为y=29797x-446.68，相关系数r=1，表明没食子酸在1.24～62μg?mL-1范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

图2没食子酸标准曲线

Fig2.gallicacidstandardcurve

2.2.5精密度试验分别精密吸取浓度为12.4μg?mL-1的同一对照品溶液，连续重复进样6次，进样量10μl，结果峰面积平均值为368582，RSD为0.27%，试验结果表明仪器精密度良好。

2.2.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别于配制后1、2、3、6、9、12h进样，记录色谱图，结果供试品溶液中没食子酸的平均含量为12.35μg?mL-1，RSD为0.15%，试验结果表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.2.7重复性试验分别精密称取同一批样品6份，按“2.2.3”项制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl进样，供试品中没食子酸平均含量为1.0362mg?g-1，RSD为0.36%，结果表明没食子酸含量测定方法重现性良好。

2.2.8加样回收率试验取已知含量样品9份，分别精密加入高、中、低浓度对照品溶液各3份，按供试品溶液的制备方法制备，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。平均回收率为100.17%，RSD=0.61%。

表1加样回收率试验（n=9）

2.2.9样品含量测定照供试品溶液的制备方法分别制备3个批次的供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL进样，记录峰面积，计算没食子酸含量，结果3批样品中没食子酸平均含量为1.03mg?g-1，RSD为1.12%。

3讨论

3.1供试品处理[3-6]供试品溶剂的选择，分别采用无水乙醇、60%乙醇、甲醇、50%甲醇、纯水对样品进行超声提取，结合液相色谱系统适用性的考察，确定采用50%甲醇作为提取溶剂，50%甲醇的提取效果最佳，色谱峰能够较好的分离，而含乙醇的溶剂提取出的样品色谱峰不能分离，无法计算峰面积。关于超声时间的考察，超声时间分别为5、10、15、30min，没食子酸的含量无显著性差异。因此，供试品的制备选用50%甲醇超声提取5min，即得。

3.2流动相的选择，本实验考察了不同比例甲醇-磷酸溶液、乙腈-冰醋酸溶液、乙腈-磷酸溶液作为流动相，均能得到较好的色谱峰。其中当甲醇-0.085%磷酸溶液（15:85)时，出峰时间较快，但色谱峰分离度不够。经预实验筛选，结合节约成本和保护色谱柱的考虑，确定采用甲醇-0.085%磷酸溶液（6:94)作为流动相。

3.3小儿腹泻颗粒虽然疗效显著，但是其处方成分复杂，不仅为中西药组合，还含有毒性药材朱砂，因此在临床使用与制剂质量控制过程中都应该严格控制，加强临床监管，提高制剂质量标准，保障患儿的生命健康。笔者结合制剂的特点，参照中国药典中五倍子的含量测定方法，建立了小儿腹泻颗粒中没食子酸的HPLC含量测定方法，该方法简单，灵敏度高，稳定性好。可用于小儿腹泻颗粒的质量控制。

参考文献

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