Survivin、COX-2和CyclinD1蛋白联合检测在子宫内膜病变中的表达及临床意义

戴伟平1吕俊丽2

1.甘肃省酒泉市人民医院病理科；2.妇产科甘肃酒泉735000

摘要：目的探讨Survivin、COX-2和CyclinD1蛋白在子宫内膜病变中的诊断价值。方法采用免疫组织化学EnVision二步法，分别检测20例分泌期子宫内膜标本、20例增生期子宫内膜标本、35例子宫内膜上皮内瘤变标本及68例子宫内膜癌标本中Survivin、COX-2和CyclinD1蛋白的表达。结果在子宫内膜癌标本中，Survivin、COX-2及CyclinD1蛋白的表达明显高于正常子宫内膜组织（P＜0.05）低分化、肌层浸润＞1/2者和III-IV期的子宫内膜癌组织中Survivin和COX-2蛋白的表达明显高于中、高分化、肌层浸润≤1/2者和I-II期者（P＜0.05）。子宫内膜癌组织中CyclinD1蛋白的表达与临床分期、分化程度相关（P＜0.05），与肌层浸润深度无关（P＞0.05）。结论Survivin、COX-2及CyclinD1蛋白在子宫内膜病变中共同参与了肿瘤的发生、发展及肿瘤的浸润和转移。

关键词：子宫内膜上皮内瘤变；子宫内膜癌；Survivin；COX-2；CyclinD1

子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，近年来其发病率在世界各地均有增高的趋势，但其发生发展的分子生物学机制尚不清楚。近年来的研究表明：Survivin（存活素）、COX-2（cyclooxygenase-2，环氧合酶-2）及CyclinD1均在人体多种恶性肿瘤组织中呈现高表达状态[1-4]。本研究拟通过EliVision二步免疫组织化学染色方法，联合检测Survivin、COX-2及CyclinD1蛋白在子宫内膜上皮内瘤变组织和子宫内膜癌组织中的表达情况及临床意义，以探讨可能用于子宫内膜上皮内瘤变及子宫内膜癌的诊断及预后的肿瘤标志物，为临床诊断及治疗提供依据。

1.资料和方法

1.1临床资料

选取酒泉市人民医院2009年至2014年的子宫内膜癌标本68例进行回顾性研究，年龄40岁-66岁，平均年龄50岁。根据FIGO分期：I期44例，II期13例，III期10例，IV期1例，组织学分级G115例，G243例，G312例。68例子宫内膜癌标本中，子宫内膜样腺癌61例，腺鳞癌3例，浆液性乳头状腺癌2例，透明细胞癌2例，子宫肌层浸润深度≤1/2者43例，＞1/2者25例。所有子宫内膜癌患者术前均未行放、化疗及激素治疗。选取同期相同年龄段子宫内膜上皮内瘤变标本35例，增生期子宫内膜20例，分泌期子宫标本20例作为对照。

1.2试剂与方法

兔抗人Survivin多克隆抗体、COX-2及CyclinD1鼠抗人单克隆抗体、免疫组化EnVision试剂盒均为即用型，购于福州迈新生物技术开发有限公司。免疫组化方法采用EnVision二步法，具体实验步骤按试剂盒说明书进行。以PBS取代第一抗体作阴性对照。每张切片随机选择10个高倍视野（×400），每个视野计数100个细胞计算阳性细胞百分比。

1.3免疫组织化学染色结果的评估

1.3.1Survivin蛋白：阳性染色为细胞质呈棕黄色颗粒。阳性细胞数＜5%为蛋白表达-；阳性细胞数5%～25%为+；阳性细胞数25%～50%为++；阳性细胞数＞50%为+++[5]。

1.3.2COX-2蛋白：阳性染色为细胞质出现棕黄色颗粒。无阳性染色细胞为蛋白表达-；阳性细胞数≤10%为+；阳性细胞数11%～50%为++：阳性细胞数＞50%为+++[6]。

1.3.3CyclinD1蛋白：阳性染色为细胞核呈棕黄色着色。无阳性染色细胞或阳性细胞≤10%为蛋白表达-；阳性细胞数11%～30%为+；阳性细胞数31%～60%为++；阳性细胞数>60%为+++[7]。

1.4统计学方法

结果采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。相关组间率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1.1Survivin蛋白在分泌期和增生期子宫内膜标本中的表达率分别为15%和5.26%，显著低于在子宫内膜上皮内瘤变标本中40%的表达率和在子宫内膜癌标本中79.41%的高表达率（P＜0.05）。

2.1.2COX-2蛋白在分泌期和增生期子宫内膜标本中的表达率分别为0和5.26%，显著低于在子宫内膜上皮内瘤变标本中68.57%的表达率和在子宫内膜癌标本中70.59%的高表达率（P＜0.05）。

2.1.3CyclinD1蛋白在分泌期和增生期子宫内膜标本中的表达率分别为0%和10%，在子宫内膜上皮内瘤变标本中的表达率为11.43%，均显著低于在子宫内膜癌标本中61.76%的高表达率（P＜0.05），但在正常子宫内膜和上皮内瘤变子宫内膜标本中无组间差异性（P＞0.05），见表1。

表1不同子宫内膜病变中Survivin、COX-2和CyclinD1蛋白的表达

3讨论

3.1子宫内膜病变中Survivin的表达及意义近年来的研究表明，Survivin是凋亡抑制蛋白（InhibitorofApoptosisProtein，IAP）家族成员之一，具有抑制细胞凋亡和调节细胞周期的双重功能，主要在G2/M期表达，具有严格的细胞周期依赖性。G2/M期凋亡监测点负责保持遗传的准确性，Survivin高表达使G2/M期监控点不能有效对肿瘤细胞进行监控，导致细胞异常增殖。本研究结果显示：分泌期子宫内膜中有Survivin的低表达，在增生期子宫内膜中几乎无表达，而在子宫内膜上皮内瘤变及子宫内膜癌组织中的表达呈现明显趋势性升高，差异有显著性，见表1。在子宫内膜癌标本中，Survivin的表达与子宫内膜癌肌层浸润深度、临床病理分期以及癌组织分化级别呈正相关，组间有显著性差异，见表2。由此我们推测，Survivin蛋白的高表达可能是子宫内膜癌发生的早期分子事件，并且赋予肿瘤细胞更多的生长优势和浸润、转移的潜能，在子宫内膜癌的发生发展中发挥重要作用。这与Tarkowski等[8]的报道一致，而与Erkanlis等[9]的报道不符，有待于进一步研究。

3.2子宫内膜病变中COX-2的表达及意义COX-2（cyclooxygenase-2，环氧合酶-2）属诱导性转录酶，在正常生理状态下多组织内检测不到，但在人体结直肠癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤组织中呈现高表达[3]。本研究结果显示：COX-2在分泌期子宫内膜及增生期子宫内膜中几乎无表达，而在子宫内膜上皮内瘤变及子宫内膜癌组织中呈现高表达，有显著性差异，而在子宫内膜上皮内瘤变和子宫内膜癌标本组之间在阳性率表达上的差异无统计学意义，见表1及图3、4。在子宫内膜癌标本中，COX-2的表达与子宫内膜癌肌层浸润深度、临床病理分期以及癌组织分化级别呈正相关，组间有显著性差异，见表2。结合Nasir等[10]的报道及本研究结果表明：在子宫内膜癌的发生发展过程中，COX-2的表达不仅是一个早期分子事件，而且在在子宫内膜癌的发生发展中发挥重要作用。因此，我们认为COX-2在区别良性子宫内膜与子宫内膜上皮内瘤变及子宫内膜癌方面具有一定的诊断价值。

3.3子宫内膜病变中CyclinD1的表达及意义CyclinD1是G1周期素家族最重要的成员，又称PRAD1、CCND1、BCL21，为目前公认的癌基因。正常情况下，CyclinD1蛋白知识在G1期呈一过性表达，其表达失控导致细胞增殖异常而产生肿瘤。CyclinD1蛋白在套细胞性淋巴瘤、食管癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、乳腺癌等恶性肿瘤中均呈现过表达状态，CyclinD1甚至已成为套细胞性淋巴瘤诊断的重要标志物[4]。本研究结果显示：CyclinD1蛋白在分泌期、增生期及子宫内膜上皮内瘤变标本中呈无表达或低表达，与在子宫内膜癌标本中的高表达有显著性差异，但在正常子宫内膜和上皮内瘤变子宫内膜标本中无组间差异性，见表1。在子宫内膜癌标本中，CyclinD1的表达与子宫内膜癌临床病理分期以及癌组织分化级别呈正相关，组间有显著性差异。虽然随着癌组织子宫肌层浸润深度增加，CyclinD1的表达率升高，但组间无显著性差异。见表2。提示CyclinD1可能是子宫内膜癌变中的一个较晚期分子事件，在子宫内膜癌的发生发展过程中协同多种肿瘤相关基因，赋予了肿瘤细胞较高的增殖活性，促使细胞恶性转化，在子宫内膜癌的发生发展中有重要作用。这与周建华等人[11]的报道一致，但与熊艳等人[12]的报道不相符，还需进一步研究证实。

综上，我们猜测Survivin、COX-2及CyclinD1蛋白在子宫内膜病变中共同参与了肿瘤的发生、发展及肿瘤的浸润和转移。对三者进行联合检测有望成为子宫内膜上皮内瘤变及子宫内膜癌的预后因素。另外，鉴于三者在子宫内膜癌发生发展中的积极作用，进行Survivin、COX-2及CyclinD1蛋白抑制剂的开发可能在子宫内膜癌的治疗方面具有一定的潜在应用价值。

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[11]郑建华，韦淑琴，赵瑾凤，等．p53及细胞周期素D1在子宫内膜癌中的表达及意义［J］．中国实用妇科与产科杂志，2003，19（11）：693-694．

[12]熊艳，熊永炎，等.p16、CyclinD1和COX-2蛋白在子宫内膜不同增生性病变中的表达及意义[J].肿瘤防治研究，2010，37（5）：551-554.