肺部真菌病的实验室诊断——真菌镜检与培养

邰福英

【摘要】肺部真菌感染的发病率在逐年增加，为了更好的治疗这一疾病，相关医学研究人员应做好肺部真菌病的实验室诊断工作，实验室检查对肺部真菌病的诊断有着重要影响，在研究的过程中，诊断的技术越来越先进，检查的方法也越来越多，这有利于促进我国医疗事业更好的发展。本文结合我院2014年收治80例肺部真菌感染患者，对样本采集方法以及肺部真菌病检查的方法进行了探讨，以供参考。

【关键字】肺部；真菌；样本；诊断；镜检；培养

在对肺部感染患者进行检查以及肺部真菌病实验室诊断时，医学研究人员首先应做好样品采集工作，采集到的样本应立即检查，不能存放过长的时间，这样才能保证检查结果的准确性，如果情况特殊无法及时检查，则需要将样本存放在冰箱中，但是存放的时间不宜超过2h。在实验室检查时，主要采用的方法是真菌镜检以及真菌培养[1]。本文结合我院实际病例，对肺部真菌病的实验室诊断方法进行介绍，加强实验与研究，有效提高了我院的诊断水平。

1、样本采集

我院在2014年1月-12月共收治了80例肺部真菌感染患者，在对肺部真菌病进行实验室诊断时，首先应做好样品的采集，在采集的过程中，我院采用了多种方法。采集样本时，应避免出现样本受到污染的问题，必要时还可以采用无菌操作的方法。样本采集可能来自痰液、血液、骨髓等，采集的数量不能小于5ml，胸水不能少于20ml。采集到的样品需要放在灭菌后的器皿中，还要标注被采集患者的姓名、年龄等基本信息。采集到的样本最好立即检查，如果做不到，则需要先存放在冰箱中，时间不能超过2h。为了避免样本表面受到杂菌污染，可以在培养基中加入适量的抗生素。下面对样品采集的方法进行简单的介绍。

1.1痰液标本采集

痰液标本采集是肺部真菌样本采集的常用方法，在对痰液进行检查的过程中，可以了解到患者气管、支气管以及肺泡的受感染程度，医护人员在采集标本时，应保证采集到的是真正的痰液，不能掺杂唾液或者鼻涕等杂质。在采集前，可以让患者用生理盐水漱口，然后再用3%的双氧水漱口，这可以去除口腔内的杂菌。采集前，患者最好用力咳出气管深处的痰液，然后将标本存放在灭菌后的器皿中，进行送检。对于少痰或者无痰的患者，可以采用导痰方法进行取痰。

1.2开放性肺活检

有的肺病患者肺部具有免疫损害，在采集样本时，需要采用开放性肺活检的方式。患者在纤维支气管镜检查后，还是无法确定病因，为了保证诊断的准确性，医院在条件允许的情况下，可以对患者进行开放性肺活组织检查[2]。这种采集方法可以提供足够的肺组织，医护人员可以在不同的点取肺组织标本，这也是保证诊断准确性的有效方式。开放性肺活检的方法，诊断阳性率比较高，而且可以改善肺部出血现象，可以避免患者出现气胸现象。但是这种采集方法需要对患者的全身进行麻醉，花费的时间比较长，而且需要应用胸腔引流管。该方法采集到的标本可以进行特殊染色、细菌、真菌以及支原体的培养。

1.3胸腔穿刺、胸膜活检

对于肺部感染合并胸腔积液的患者，可以采用胸腔穿刺、胸膜活检的采集方法，通过收集胸水，可以对特异性病原菌进行鉴定，这有利于提高诊断的准确性。如果胸腔积液未培养出病原菌，则需要进行胸膜活检，其有利于确定患者病因诊断，在胸膜活检前，患者应对胸部拍X片，还要进行超声定位，在胸腔膜穿刺针，抽出胸液，然后送检。

2、真菌镜检与培养方法

2.1真菌镜检

真菌镜检的过程中，研究人员应立即对采集到的样本进行检查，检查结果显示为阳性，则表示有真菌感染，这种检查方法具有方便、快捷的优点，对临床诊断以及治疗有着促进作用。但是直接检查的方法适用范围比较小，其适用于新生隐球菌、皮炎芽生菌、副球孢子菌等，其他菌种并不适合采用这种检查方法，必须先经过培养才能检查，而且直接检查显示为阴性，也不排除有真菌感染的可能。

在检查的过程中，首先要将标本放置在载玻片上，然后加一滴载液，再盖上盖玻片，对其微微加热，研究人员在火焰上快速通过2-3次即可，如果加热时间过长，会出现结晶现象，影响了检查结果的准确性。在盖盖玻片时，还要对其进行轻压，避免存在气泡，还要将标本压薄，研究人员还要采用吸纸将去除周围的溢液，保证实验环境的洁净性。在压盖玻片时，应保证标本的均匀性，而且标本越薄越好。对于毛发标本，则不能多度施压，这会破坏其结构。检查时还要做好遮光处理，避免受到强光的感染。可以在低倍镜下检查是否存在菌丝以及孢子，然后再用高倍镜对其位置、排列、特征进行观察。检查时还要注意避免镜头受到载液的腐蚀。

2.2真菌培养方法

培养的目的在于从临床标本中分离真菌，以确定是否有真菌感染，特别是在直接检查为阴性时[3]。在培养过程中可对真菌的形态、镜下结构、生理特点和生化特性进行充分研究，以推断其应归隶的科、属和种，指导临床治疗。常见的真菌培养方法有：直接培养、间接培养、试管培养等。

(1)直接培养:从患者身上采取标本后直接接种在培养基上。直接培养应注意无菌操作，消毒严格，动作准确、迅速，防止污染，提高培养的阳性率。

(2)间接培养:采取标本后，暂保存，然后集中接种。这种方法节省时间，也较方便，但污染机会多，故目前一般不应采取这种方法。临床标本如血、痰、脑脊液等应在2h内接种完毕。

(3)试管培养:是真菌实验室最常用的培养方法之一，主要用于临床标本分离的初代培养。试管培养法的优点是不易污染、节省培养基。缺点是试管的斜面较小，有时不能完全显示菌落的全部形态。

3、结语

近年来，肺部疾病的发病率在不断升高，为了提高治疗水平，医院应做好肺部真菌病的诊断以及检查。实验室诊断的过程中，医院首先要对真菌样品进行采集，还要对肺部真菌病原体进行诊断，保证诊断结果的准确性。对采集的到样品，一定要及时检查，如果存放的时间过长，可能会导致样品受到污染。另外，研究人员还需要对诊断的技术以及实验室鉴定技术进行改进，这样才能提高医院的诊断水平。

参考文献

[1]张世强，刘涛.肺部真菌病36例临床分析[J].中国煤炭工业医学杂志.2010(08)：22-23

[2]荣天畅.肺部真菌病治疗的药物选择[J].当代临床医刊.2015(03):11-13

[3]李文琪，郭常亮.慢性阻塞性肺病急性期合并侵袭性肺曲霉菌病12例分析[J].人民军医.2015(06):53-54