简介：摘要目的对多重实时定量PCR(real-time quantitative PCR，qPCR)进行反应体系筛选和方法探索，使其用于G1—G4型轮状病毒VP7基因的快速分型和定量分析。方法设计G1—G4型轮状病毒VP7基因特异性引物和探针，以特异性体外转录RNA为模板，筛选多重qPCR反应体系，建立多重qPCR方法。采用单因素方差分析和配对样本t检验对多重与单重qPCR检测结果进行比较。结果经筛选，得到6组三重qPCR反应体系和1组四重qPCR反应体系。所建立的三重和四重qPCR中，除四重qPCR的G1型参数〔标准曲线决定系数(R2)为0.982、扩增效率为89.221%〕略低于要求外，其余标准曲线R2均>0.99，扩增效率均在90%至110%之间；检测灵敏度达102拷贝/μl。多重与单重qPCR检测同一样本的相关性较好(R2>0.95)。三重与单重qPCR(t值为1.420～25.786)、四重与单重qPCR(t值为2.505～4.851)检测结果间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论建立的多重qPCR可同时对3种以上目的基因进行分型和定量检测，为未来多价轮状病毒疫苗及混合病毒样本中毒株的快速分型和定量检测方法的建立提供了借鉴。

简介：摘要目的建立人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3，HPIV3)感染小鼠模型，并研究其免疫应答特点。方法用HPIV3兰州分离株HPIV3LZ1728C19毒株鼻腔接种BALB/c小鼠，每天检测体温和体质量。用ELISA检测血清HPIV3特异性IgG、IgA滴度，实时定量PCR检测鼻腔灌洗液和肺组织病毒滴度，流式细胞术检测外周血、肺、脾淋巴细胞中的HPIV3特异性IFN-γ CD4+和IFN-γ CD8+ T细胞，酶联免疫斑点法检测分泌HPIV3特异性IgG/IgA的B淋巴细胞，肺组织切片观察病理变化。结果感染后第3天，小鼠鼻腔和肺的病毒负载量分别到达峰值104拷贝/ml鼻洗液和107拷贝/g组织，肺部发生炎症性病理变化。感染组早期体质量增加显著滞后于对照组(感染后第3天：t＝4.64，P<0.05)。感染组血清中HPIV3特异性IgG(t＝2.94，P<0.05)和IgA水平(t＝18.66，P<0.05)显著增高，外周血、肺、脾均出现HPIV3特异性抗体分泌淋巴细胞。病毒感染诱导小鼠肺产生记忆性IFN-γ CD8+ T和IFN-γ CD4+ T细胞应答，脾和外周血产生IFN-γ CD4+ T细胞应答。结论成功建立了HPIV3感染小鼠动物模型，感染小鼠产生了显著的肺黏膜体液和细胞免疫应答。