简介：摘要人腺病毒（HAdV）是急性呼吸道感染、腹泻、急性眼角结膜炎等多种疾病的常见病原体。许多研究表明HAdV基因组易发生基因重组，进而形成新的基因型别，迄今已报道的104个型别中53~104型为重组形成的新基因型，在全球范围内引起多次疫情，对疾病的防控提出新挑战。目前对其重组研究较少，亟需深入研究以揭示重组机制及临床意义。

简介：目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.

简介：目的构建人survivin基因shRNA重组腺病毒载体,为缺氧性肺动脉高压（Hypoxicpulmonaryhypertension,HPH）的基因治疗研究提供实验基础。方法构建survivin-siRNA表达质粒,测序鉴定正确后,将survivin-siRNA表达质粒与含有腺病毒右臂的骨架质粒pBHGE3共转染至人293A细胞,包装成腺病毒Ad-survivin并扩增,TCID50法测定病毒滴度。将人肺动脉平滑肌细胞缺氧培养24h,并将细胞分为空白对照组（Con组）,阴性对照组（Ad-LacZ组）,不同Adsurvivin序列的干扰组（sh1组、sh2组、sh3组）。Ad-survivin感染缺氧人肺动脉平滑肌细胞,Westernblot检测survivin蛋白,验证重组腺病毒干扰效果。结果（1）将shRNA片段与pAd-U6-CMV连接后的质粒进行测序,结果提示目的基因片段插入成功;（2）TCID50法测定病毒Ad-survivin-shRNA1、Ad-survivin-shRNA2和Ad-survivin-shRNA3的滴度分别是1×1010,1.2×1010,1×1010;（3）sh2组缺氧人肺动脉平滑肌细胞内survivin蛋白表达明显低于其他4组（P〈0.05）。结论本研究成功构建人survivin腺病毒载体,为研究survivin基因在缺氧性肺动脉高压中的作用提供了实验基础。

简介：膀胱癌的发病率在我国泌尿系统肿瘤中位居第一，多发、难治和术后复发率高是膀胱癌的特点，目前以手术切除为主、放化疗为辅的治疗方案效果均不理想。膀胱癌的复发和转移率仍然很高，特别是对于晚期肿瘤、表浅膀胱癌以及有耐药性的原位膀胱癌。鉴于这种现状，迫切需要新的治疗方法的出现。重组腺病毒介导的膀胱癌基因治疗是目前关注最多的治疗方法。

简介：摘要目的构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体。方法应用RT-PCR方法从小鼠脑组织中扩增分离CXCR3基因，经双酶切位点插入腺病毒载体pacAd5中，经氨苄青霉素抗性筛选、酶切及DNA测序方法验证目的基因。采用Lipofectamine?2000将重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞，包装、扩增后测定病毒滴度。结果RT-PCR方法获得1.1Kb目的基因CXCR3，经氨苄青霉素抗性筛选的重组克隆经酶切及DNA测序证实为目的基因。重组CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞后获得包装及扩增，病毒滴度达1.8×108PFU/ml。结论本研究成功构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5，可用于进一步研究CXCR3参与多种疾病转归的分子免疫机制。

简介：

简介：腺病毒基因组约为35kb，分为7个血清型，采用其中较为安全的血清型2和5可作为载体。腺病毒做为载体有很多优点：它能感染广泛的细胞类型；能感染分裂细胞或不分裂细胞；腺病毒的疫苗已为人们使用．

简介：摘要目的研究嵌合腺病毒35型载体和痘苗病毒载体SIVenvT疫苗通过不同策略联合免疫小鼠所诱导的细胞和体液免疫应答。方法通过PCR和Western blot方法对表达SIV mac239株SIVenvT基因的重组嵌合腺病毒35型(rAd5F35-SIVenvT)和重组痘苗病毒安卡拉株(rMVA-SIVenvT)进行体外鉴定。采用两种不同的策略联合免疫BALB/c小鼠，即同源载体免疫和异源载体免疫。通过ELISPOT方法检测小鼠脾脏中分泌SIV Env特异性IFN-γ的淋巴细胞数量，ELISA方法检测血清SIV gp120抗体滴度，比较两种免疫策略诱导小鼠产生细胞和体液免疫应答的差异。结果rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT均能在HEK293细胞中有效表达SIVenvT蛋白。初次免疫后第4周，两组SIV Env特异性细胞免疫应答和SIV gp120抗体均达到峰值，随后呈波动下降趋势。异源免疫组诱导小鼠的应答水平高于同源组，其中第4周和第16周异源组细胞免疫应答强度显著高于同源组，第4周异源组SIV gp120抗体滴度显著高于同源组。结论rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT两种载体疫苗联合免疫策略能诱导小鼠产生较强细胞和体液免疫应答。

简介：目的：构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20,检测体外转染小鼠结肠癌细胞CT-26后的产物表达。方法：通过EcoRI/SalI双酶切CCL20质粒和pDC316质粒,将获取编码CCL20的基因片段连接到pDC316重组穿梭质粒。将测序正确的穿梭质粒pDC316-CCL20与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共同转染293T细胞,构建重组腺病毒载体Ad5-CCL20。予Ad5-CCL20体外转染结肠癌细胞CT-26,Westernblotting和Elisa检测转染后不同时间段CCL20的表达情况,并以含CCL20的上清分别对mDC、iDC进行趋化实验。结果：成功构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20;Westernblotting和Elisa均检测到CCL20表达,且CCL20表达量随病毒转染CT-26细胞的时间延长而逐渐增加;趋化实验表明,趋化因子CCL20对iDC、mDC都有趋化作用,但对iDC的趋化作用更加明显（P〈0.05）。结论：重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及获取为后续开展肿瘤的免疫治疗提供实验基础。

简介：肺癌是影响人类健康最危险的恶性肿瘤之一，近二十年来五年生存率并没有显著的提高，与治疗方法上缺少有效突破有一定的关系。已经证明肺癌与很多癌基因的激活和抑癌基因的缺陷或缺失有关，后者主要有p53、p16、p15基因。近年来肺癌的基因治疗成为热门，也取得了突飞猛进的发展，批准进入临床试验的基因制剂和治疗方案逐年增多，预示基因治疗将成为21世纪最重要的治疗手段。

简介：目的：研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达。方法：将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体。提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成病毒,并扩增到所需滴度。行Westernblotting鉴定,观察重组腺病毒载体在真核细胞的表达。结果：（1）重组穿梭质粒的MluI酶切鉴定结果显示,酶切结果均与相应的载体及目的片段的大小相符合,基因测序结果基本一致。（2）凝胶电泳产生了两条大约15kb和8.5kb的片段,由图2可知重组腺病毒质粒酶切充分完全,且回收率较高。（3）重组腺病毒载体转染AD293细胞24h后已出现细胞病变效应,病变细胞细胞核变大。（4）D260/OD280的值为1.92,表明重组腺病毒纯度较高。（5）AD293细胞病毒上清中有能与抗Survivin单抗反应的蛋白,其相对分子质量与理论值相吻合,阴性对照组无对应条带出现。结论：本方法成功构建表达了含Survivin的重组腺病毒载体,为进一步进行Survivin基因功能的研究提供了实验基础和理论支持。

简介：目的：构建白细胞介素7（IL-7）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）共表达的重组腺病毒载体,为进一步感染干细胞奠定基础。方法：将目的基因IL-7克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中扩增,纯化后测定病毒滴度。结果：pShuttle-EGFP-mIL7重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.5kb和5.1kb2条带;pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体质粒经酶切鉴定得到14K、11.8K、3.1kb、2.66kb、2.47K、1.45K、0.6K7条带;TCID50法测定纯化后的病毒滴度为2×10^10pfu/ml。结论：pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体构建成功。

简介：鸽腺病毒感染病是一种流行范围极广泛的潜在病原体感染所引起的急性传染病。实验表明，将病鸽与健康鸽放在一起，甚至将病鸽呕出的胃液注入健康鸽的嗉囊内也不一定使健康鸽发病，

简介：目的：探讨重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）治疗恶性肿瘤的疗效及安全性。方法：对67例晚期无法行手术切除的恶性肿瘤患者,或术后肿瘤转移、无法再手术的患者,采用瘤内注射、血管介入和静脉滴注rAd-p53联合化疗和放疗,至少1个疗程以上,通过临床观察、KPS评分、CT或MRI检查以及随访,评价rAd-p53联合化、放疗的临床疗效。结果：67例患者治疗有效率为47.8%,疾病控制率为89.6%,其中CR患者4例,分别为卵巢癌1例,皮肤癌1例,鼻咽癌2例。rAd-p53联合放疗41例,联合化疗26例,有效率分别为56.1%和34.6%（P〈0.05）,疾病控制率分别为95.1%和80.8%（P〈0.05）。全组中位生存时间为60个月（6～117个月）;联合治疗后,全组中位生存时间为24个月（2～34个月）。不良反应主要为自限性发热,另有个别胃肠道反应及肌肉酸痛。结论：rAd-p53对多种恶性肿瘤具有一定疗效,临床应用安全;局部给药联合放疗可能比联合化疗更能提高肿瘤的局控率。

简介：摘要重组人P53腺病毒注射液是由5型腺病毒载体与人P53基因重组的肿瘤基因治疗制品。P53基因指导合称P53蛋白，P53蛋白的表达量很低，在受到DNA损伤等刺激时，P53蛋白表达量升高，发挥细胞增殖调节的作用，抑制细胞分裂，诱导细胞凋亡，P53基因突变频率可高达50%～70%，因此已成功应用于头颈肿瘤。我科2013年—2015年应用重组人P53腺病毒注射液进行头颈肿瘤治疗共计24例，通过积极的治疗和相应的护理措施，患者治疗都已顺利完成。

简介：摘要目的研究分析在腺病毒肺炎患者中采取重组人干扰素a2b雾化吸入治疗的临床效果。方法回顾性分析2016年7月—2018年7月期间收入的40例腺病毒肺炎患者涉及的数据，以随机法分为参照组和实验组，将吸入利巴韦林气雾剂治疗的设为参照组（n=20），将重组人干扰素a2b雾化吸入治疗设为实验组（n=20），对两组临床疗效实施比较。结果实验组总有效率、啰音改善时间、咳嗽改善时间、喘憋改善时间、退热时间均优于参照组，两组比较差异显著（P＜0.05）。结论将重组人干扰素a2b雾化吸入治疗应用于腺病毒肺炎患者中可缩短退热时间，促使尽早改善临床症状。

简介：

简介：2．2腺病毒在我国流行的情况如何？同其他国家的流行趋势类似，我国腺病毒的肆虐时间也在上世纪50-60年代。1958年以来我国各地相继证实，腺病毒除引起上呼吸道感染外，还可引起小儿肺炎，6个月至2岁的婴幼儿腺病毒肺炎最为危重，尤以北方各省多见，病情严重者也较南方多。

简介：

简介：摘要目的探讨重组人P53腺病毒注射液配合化疗药物经外周血管介入途径治疗恶性肿瘤的疗效。方法对42例腹部中晚期恶性肿瘤患者经股动脉插管至肿瘤供血血管，注入重组人P53腺病毒注射液、化疗药及栓塞剂。结果42例患者全部有效，治疗后，临床症状缓解，生活质量提高。结论重组人P53腺病毒注射液在外周血管介入治疗中的效果显著，为介入用药的一种新选择。