简介:摘要目的构建并拯救增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)标记的EGFP-EV-A71重组病毒。方法利用重叠PCR技术,以pMD19T-SDLY107全长质粒为模板,将2A蛋白酶识别序列加入到结构蛋白VP4的5′端;以pEGFP-N1质粒作为模板,扩增获得EGFP目的片段,将其插入到上述重组质粒中,得到重组质粒pMD19T-107-EGFP。经酶切和体外转录后,转染横纹肌细胞肉瘤(RD),拯救获得重组病毒EGFP-EV-A71。采用Karber法计算细胞培养半数感染量(CCID50)以测定病毒滴度。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同时间点的病毒复制水平,并绘制病毒复制曲线,比较重组病毒与母本病毒的复制力有无差异。乳酸脱氢酶(LDH)和细胞增殖(CCK-8)实验分别测定被感染细胞的细胞损伤率和存活率。结果包含EGFP的重组EV-A71感染性cDNA克隆被成功构建;转染RD细胞后,出现典型的细胞病变并且表达出较强的绿色荧光;重组病毒与母本病毒具有相似的复制动力学特征和致细胞病变效应。结论成功拯救了EGFP标记的重组病毒EGFP-EV-A71。
简介:铜绿假单胞菌是院内感染的主要病原菌,在医院感染分离菌中的分离率居首位,对多种抗生素表现出固有或获得性耐药。铜绿假单胞菌通过Ⅲ型分泌系统将其毒力因子注入到真核宿主细胞内部,逃避宿主巨噬细胞的吞噬降解,引起宿主病理变化。对Ⅲ型分泌系统毒力因子的致病机制和抑制剂的研究对预防及治疗其引起的感染具有重要意义。本文就铜绿假单胞菌的Ⅲ型分泌系统以及其分泌的毒力因子抑制剂作一概述。
简介:摘要目的讨论丙型病毒性肝炎的治疗。方法根据患者临床表现结合检查结果进行诊断并治疗。结论慢性丙型肝炎治疗的首要目标是清除病毒(检测不到血清HCVRNA),其次则为减少肝损害持续正常的ALT水平和(或)改善肝活组织检查结果,进而达到延缓或预防肝硬化、肝细胞肿瘤、必需肝移植乃至相关死亡发生的目的。
简介:虹鳟IHNV-B病毒血清型测定赵志壮(中国水产科学研究院黑龙江水产研究所)1990年在我国本溪虹鳟鱼场患病鱼苗中分离出一株弹状病毒,对其进行了理化特性、生物学特性测定,并进行了电子显微镜观察,鉴于该病毒与已报道的IHN病毒在形态、特性及流行病学上的一...
简介:目的了解北京地区不同人群柯萨奇病毒A16型(coxsachievirusA16,CoxA16)和肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)感染状况。方法2012年对北京9区进行整群随机抽样,采集血样,开展血清流行病学调查。用酶联免疫吸附实验检测血清中抗CoxA16和抗EV71免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)和免疫球蛋白M(immunoglobulinM,IgM)抗体。结果2140名被研究人群中,抗EV71IgG和IgM阳性率分别为27.0%和1.6%,抗CoxA16IgG和IgM的阳性率分别为48.5%和4.2%,抗EV71IgM与抗CoxA16IgM同时阳性阳性率为0.7%,抗EV71IgG与抗CoxA16IgG同时阳性阳性率为17.2%。各年龄组抗EV71IgM、IgG阳性率、抗CoxA16IgM、IgG阳性率、抗EV71IgM和抗CoxA16IgM同时阳性的阳性率、抗EV71IgG和抗CoxA16IgG同时阳性阳性率差异均有统计学意义(均有P〈0.05)。1~岁组抗EV71IgM阳性率最高,5~岁组抗CoxA16IgM阳性率最高,10~岁组抗EV71IgG和20~岁组抗CoxA16IgG阳性率最高。女性抗CoxA16IgG阳性率高于男性。结论低龄组儿童是手足口病防控的重点人群,手足口病防控措施制定应考虑地域分布因素。
简介:摘要目的建立指环病毒7型(TTV7)、8型(TTV8)、10型(TTV10)实时荧光定量PCR检测体系并进行临床验证。方法本研究根据GenBank已发布的TTV7、TTV8、TTV10基因序列设计特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-TTV7、pMD19-T-TTV8、pMD19-T-TTV10,以其作为阳性标准品建立了基于FAM-Eclipse探针法的实时荧光定量PCR检测,并进行特异性、敏感性试验与临床样本检测。结果TTV7、TTV8、TTV10的实时荧光定量PCR检测体系标准曲线方程分别为y=-0.340 2x+114.780 0、y=-0.351 1x+114.940 0、y=-0.348 9x+115.020 0,相关系数都在0.99以上,与其他病毒无交叉反应,检测敏感性分别为108拷贝/μl、84拷贝/μl、98拷贝/μl。在临床小儿血清样本中的检测阳性率分别为10.9%、2.1%和4.3%。结论本研究建立的TTV7、TTV8、TTV10实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏性高等特点,可为临床血清样本TTV检测提供一个快速手段。
简介:摘要目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24 ℃和37 ℃条件下,保存时间为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,分别提取各保存液中的病毒核酸,采用逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和逆转录数字PCR方法(RT-dPCR)检测病毒核酸的含量变化。结果四种商业化病毒保存液A、E、G、H在不同温度和时间条件下对病毒核酸的保存效果明显。另外四种保存液保护效果较差:保存液B和C在37 ℃条件下12 h后保存效果变差,保存液D的保存效果在24 ℃和37 ℃下6 h后均明显减弱;保存液F对病毒核酸没有任何保护作用。结论病毒保存液的保护效果差会导致核酸检测的假阴性,建议开展核酸检测时对使用的病毒保护液进行质量控制。