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  • 简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) MYOSLID靶向微小RNA(miR)-339-5p调控肺癌细胞生物学行为的分子机制。方法收集2016年5月至2018年4月于本院接受手术治疗的肺癌组织及癌旁组织标本20例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肺癌组织及癌旁组织中MYOSLID与miR-339-5p的表达。体外培养肺癌细胞株A549并分组转染,用噻唑蓝(MTT)、双荧光素酶报告实验验证MYOSLID对miR-339-5p的靶向调控作用;通过细胞转染及分组,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告基因检测,蛋白质印迹法(Western blot)检测,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),负向调控因子P21(p21),B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、金属蛋白酶2(MMP)-2、MMP-9蛋白表达用Image J软件分析各条带灰度值。结果抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞活力及Cyclin D1蛋白相对表达量,si-MYOSLID组低于si-NC组[1.00±0.09比0.42±0.04,t=17.667,P<0.05;0.74±0.06比0.31±0.03,t=19.230,P<0.05];p21蛋白si-MYOSLID组高于si-NC组[0.28±0.03比0.69±0.06,t=18.335,P<0.05,],差异有统计学意义。抑制lncRNA MY OSLID表达对肺癌A549细胞凋亡率(%)及bax的表达水平,si-MYOSLID组明显高于si-NC组[6.32±0.64比19.48±1.83,t=20.317,P<0.05;0.32±0.03比0.71±0.07,t=15.362,P<0.05];bcl-2蛋白的表达水平,si-MYOSLID组明显高于si-NC组[0.62±0.06比0.23±0.03,t=17.441,P<0.05],差异有统计学意义。抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞迁移与侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9的表达水平,si-MYOSLID组低于si-NC组[0.22±0.06比0.43±0.01,t=14.441,P<0.05;0.15±0.02比0.37±0.02,t=10.410,P<0.05;0.36±0.02比0.48±0.02,t=16.041,P<0.05],差异有统计学意义。miR-NC组肺癌A549细胞增殖、凋亡率低于miR-339-5p组[(1.00±0.09)%比(2.58±0.25)%,t=17.839,P<0.05;(7.32±0.74)%比(17.45±1.63)%,t=16.041,P<0.05];迁移细胞数及侵袭细胞数,miR-NC组高于miR-339-5p组(98.36±9.54比52.64±5.28,t=12.579,P<0.05;84.33±8.41比44.69±5.17,t=12.046,P<0.05),差异有统计学意义。miR-339-5p过表达对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的影响-Cyclin D1蛋白表达,miR-NC组高于miR-339-5p组(0.76±0.07比0.38±0.03,t=14.968,P<0.05);p21蛋白表达miR-NC组低于miR-339-5p组(0.27±0.03比0.64±0.06,t=16.546,P<0.05);bcl-2蛋白表达,MMP-9蛋白表达,MMP-2蛋白表达,miR-NC组低于miR-339-5p组(0.61±0.06比0.28±0.03,t=14.758,P<0.05;0.71±0.07比0.33±0.03,t=14.968,P<0.05;0.88±0.08比0.43±0.04,t=15.093,P<0.05)bax蛋白表达,miR-NC组低于miR-339-5p组(0.31±0.03比0.68±0.06,t=16.546,P<0.05),差异有统计学意义。干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭的作用,与si-NC组比较,si-MYOSLID组逆转miR-339-5p表达,凋亡率(%)及迁移细胞数最明显,si-MYOSLID和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p差异有统计学意义[(2.41±0.24)比(1.53±0.14),F=119.730,P<0.05;(19.63±1.95)比(12.48±1.23),F=130.702,P<0.05;(43.16±4.38)比(82.64±8.26),F=141.749,P<0.05];与si-MYOSLID+anti-miR-NC组比较,si-MYOSLID+anti-miR-339-5p凋亡率[(12.48±1.23)%,F=130.027,P<0.05]干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的作用,蛋白表达si-MYOSLID组和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p组差异有统计学意义。结果显示抑制MYOSLID的表达可通过靶向miR-339-5p而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并可诱导细胞凋亡,MYOSLID可能为肺癌治疗的潜在新靶点。结论lncRNA MYOSLID通过调控miR-339-5p促进肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡。

  • 标签: 长链非编码RNA 微小RNA 肺癌 增殖 迁移 侵袭 凋亡