摘要
摘要目的研究过氧化氢处理体外培养小鼠晶状体蛋白渗漏情况，并对其所渗漏的蛋白进行鉴定和生物信息分析。方法分离42只健康成年雄性C57BL/6J小鼠双眼完整晶状体，任意合并28个晶状体作为一个样本，共3个样本。体外培养小鼠晶状体，以含2 mmol/L过氧化氢培养液进行培养，构建体外白内障模型。以空白培养液作为对照组。收集培养24 h上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。采用液相质谱联用对上清液蛋白质进行结构鉴定并采用无标记定量质谱法定量分析高丰度蛋白。采用METASCAPE数据库对鉴定的蛋白进行生物信息分析。采用多重微珠免疫分析系统测定上清液中细胞因子的含量。结果过氧化氢处理24 h，所有晶状体均混浊且囊膜完整。上清液中总蛋白质量浓度为(3.73±0.59)μg/μl。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示，蛋白条带主要位于相对分子质量35 000以下。质谱分析共鉴定出675种蛋白，其中包括16种晶状体蛋白，占总蛋白丰度的(86.1±0.8)%；蛋白涉及的生物学过程主要包括细胞-细胞黏附、细胞转化、氧化还原、抑制细胞凋亡和蛋白质转运；涉及的分子功能主要包括水解酶活性、氧化还原酶活性、催化活性、翻译起始因子活性和GTPase活性；亚细胞定位主要为细胞质、外泌体、细胞核、质膜和胞外间隙。基于抗体的多重微珠免疫分析结果显示，体外培养上清液中可定量检测到9种细胞因子，包括在眼内液高表达的单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β2。结论过氧化氢处理体外培养的晶状体存在蛋白质渗漏，这些渗漏蛋白可能对眼内其他组织的代谢、功能产生影响。
出版日期
2021年05月30日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
