摘要
目的观察脐血来源的未成熟树突状细胞（imDC）低温冻存前后的生物学特性，探讨imDC的保存方法。方法取新鲜脐血分离单个核细胞（MNC），在体外经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素（rhIL）4诱导产生imDC后，加入二甲亚砜（DMSO）作为保护剂，-80℃降温，-196℃保存，40℃水浴复温，获得冻存imDC。光学显微镜下观察冻存的imDC与新鲜imDC形态，计算其锥虫蓝拒染回收率（TBR）；流式细胞仪检测细胞表面成熟标志；混合淋巴细胞反应（MLR）检测细胞刺激未致敏T淋巴细胞的增殖能力。结果脐血MNC在rhGM-CSF和rhIL-4诱导下可向树突状细胞（DC）分化，相差显微镜显示细胞形态不规则，细胞表面呈树枝样突起；扫描电镜显示，细胞表面不规则，有树枝样突起和不规则皱褶。冻存imDC复苏后TBR为（86．8±1．3）％，冻存imDC在形态上与新鲜imDC无明显差异。MNC体外经rhGM—CSF和rhIL-4诱导生成的imDC表面CD1a阳性率为（62±8）％、CD14为（18±7）％、人类白细胞DR抗原（HLA—DR）为（67±5）％、CD80为（13±7）％、CD86为（12±5）％；反映DC成熟的表面标志物CD83为（4．6±2．0）％，符合imDC的表型特征。冻存imDC的CD80、CD86、CD83分别为（15±5）％、（17±5）％、（7、4±3．3）％，较新鲜imDC有所增高（P〈0.05），但仍符合imDC的表型特征。对照组MLR的每分钟放射性荧光闪烁计数（cpm）值为（488±197）min^-1；新鲜imDC组为（463±104）min^-1，与冻存imDC组的cpm值（512±78）min^-1。比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。各组细胞刺激指数（SI）均〈2。新鲜imDC和冻存imDC均不能有效刺激同种未致敏T淋巴细胞增殖。结论本实验中获得的冻存imDC具有足够的细胞活力，其细胞免疫表型和细胞功能具有不成熟特征，说明利用DMSO低温保存imDC的方法可行。
出版日期
2006年06月16日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
